新型移动HIV-DNA检测技术

　　

生物通报道：最近，在国际知名杂志《Analytical Chemistry》发表的一项研究中，美国莱斯大学的生物工程师们研发出一种简单、高度精确的检测技术，来检测患者体内的HIV迹象及病情发展情况。

莱斯大学生物工程师、全球卫生技术学院的主任Rebecca Richards-Kortum称，当前诊断婴儿HIV和监测病毒载量的金标准，通常是依赖仅在诊所可用的实验室设备和专业技术。这项研究，开发出以核酸为基础的新型HIV检测技术，能够在医疗保健单位进行检测。

本文共同第一作者是Richards-Kortum 实验室的研究生Zachary Crannell和Brittany Rohrman，他们开展了这项概念验证性工作，在今年早些时候，他们利用类似的技术检测到引起腹泻病隐孢子虫病的寄生虫。

这项新型检测技术，用基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术取代了基于聚合酶链式反应的复杂实验室程序，RPA可以对血液中的遗传标记物进行快速多重扩增，从而使病毒的遗传标记物很容易地检测到。在一个被称为qRPA的检测中，利用可通过轻便机器进行定量检测的荧光探针，靶定和标记HIV DNA中的一段特定序列。最后，通过荧光DNA的软件分析，就可使得临床医生以极高的准确性，来确定病毒是否存在于患者的血液内，或病毒的量是多少。

研究人员通过放大内部阳性对照对测试进行校准。Rohrman称：“利用跟HIV序列相同的引物扩增，因此检测试验可以正常进行。”研究人员最初只是打算寻找婴儿中的HIV，但是该技术还可以帮助他们追踪老年患者机体中的病毒载量。Crannell称：“临床医生能够实时监测患者体内的病毒载量，从而确保患者是否对治疗发生反应，这非常的重要。”

研究人员称，为了临床可行性，一种HIV DNA检测能够定量的病毒载量，必须超过四个数量级，从很高到很低。他们称，这种新型试验很容易满足这个目标。

他们正在开发用于资源匮乏地区的工具，在这些地区高科技实验室设备无法使用。尽管研究人员使用热循环仪来进行检测，但他们正在研究一种技术，使得整个操作步骤维持在室温和体温之间，从而确保实验的通用性和准确性。

（生物通：王英）

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生物通推荐原文摘要：
Quantification of HIV-1 DNA Using Real-Time Recombinase Polymerase Amplification
Abstract: Although recombinase polymerase amplification (RPA) has many advantages for the detection of pathogenic nucleic acids in point-of-care applications, RPA has not yet been implemented to quantify sample concentration using a standard curve. Here, we describe a real-time RPA assay with an internal positive control and an algorithm that analyzes real-time fluorescence data to quantify HIV-1 DNA. We show that DNA concentration and the onset of detectable amplification are correlated by an exponential standard curve. In a set of experiments in which the standard curve and algorithm were used to analyze and quantify additional DNA samples, the algorithm predicted an average concentration within 1 order of magnitude of the correct concentration for all HIV-1 DNA concentrations tested. These results suggest that quantitative RPA (qRPA) may serve as a powerful tool for quantifying nucleic acids and may be adapted for use in single-sample point-of-care diagnostic systems.