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蛋白质印迹手册1：膜的选择
【字体： 大 中 小 】 时间：2014年05月19日 来源：默克密理博
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PVDF膜和NC膜作为Western印迹应用中最常用的两种类型的膜，各有什么特点？我们该如何选择？近四十年来，默克密理博一直是转印膜的领先供应商。它目前提供三种PVDF膜。这三种膜有何不同，分别适合哪些应用呢？详见本文。
Part 1 膜的选择
印迹所使用的膜的类型可能影响下列因素：
• 蛋白质结合能力
• 是否需要用醇预湿
• 开展多次剥离（stripping）和再生检测（reprobing）实验的能力
• 蛋白质观察
• 长期印迹保存
• 信噪比
聚偏二氟乙烯（PVDF）和硝酸纤维素是Western印迹应用中最常用的两种类型的膜。
与硝酸纤维素膜相比，电转到PVDF膜上有许多优点。PVDF膜可提供更好的蛋白质截留率、物理强度和广泛的化学兼容性（Pluskal等，1986）。其中更高的机械强度和出色的耐化学性让PVDF膜成为免疫检测中各种染色应用和二次检测的理想选择。使用PVDF膜的另一个优点是，单块凝胶上的平行重复泳道可用于各种应用中，如考马斯蓝染色，接着切割条带进行N端测序，蛋白质水解/肽段分离/内部测序，以及免疫检测（Kurien等，2003）。市售的硝酸纤维素膜的典型结合能力是80 – 100 μg/cm2，而PVDF膜的结合能力是100 – 200 μg/cm2。
在检测血清中人免疫缺陷病毒（HIV）时直接比较PVDF和硝酸纤维素膜，结果表明，PVDF膜有着更好的总体HIV抗原截留率，并且有助于改善提高抗体对糖基化包膜抗原的检测（Lauritzen和 Pluskal，1998）。硝酸纤维素膜和PVDF膜的特性比较详见表1。
表1. PVDF和硝酸纤维素膜特性及应用的比较。
|
特性/应用 |
硝酸纤维素 |
PVDF |
|
物理强度 |
差 |
好 |
|
蛋白质结合能力 |
80 – 100 μg/cm2 |
100 – 300 μg/cm2 |
|
耐溶剂性 |
否 |
是 |
|
Western转移 |
是 |
是 |
|
总蛋白染料 |
胶体金 |
胶体金 |
|
丽春红 |
丽春红 | |
|
氨基黑 |
氨基黑 | |
|
印度墨汁 |
印度墨汁 | |
|
Sypro® 印迹染料 |
考马斯蓝染料 | |
|
显色 | ||
|
化学发光 |
化学发光 | |
|
荧光 |
荧光 | |
|
放射性 |
化学荧光 | |
|
|
放射性 | |
|
双印迹方法 |
否 |
是 |
|
快速免疫检测 |
否 |
是 |
|
Western再次杂交 |
是 |
是 |
|
Edman测序 |
否 |
是 |
|
氨基酸分析 |
是 |
是 |
|
SDS存在下的结合 |
差 |
好 |
|
膜上消化或质谱分析 |
否 |
是 |
|
直接MALDI-TOF MS分析 |
否 |
是 |
|
数据可存档 |
否 |
是 |
Immobilon® PVDF转印膜
默克密理博提供三种PVDF膜：
• Immobilon®-P膜（0.45 μm）是一种通用的基质，适用于一般的免疫印迹应用。
• Immobilon®-PSQ膜（0.2 μm）适用于蛋白质测序和低分子量蛋白的免疫印迹。它有着更高的蛋白质结合能力以及比0.45 μm膜更高的截留率。
• Immobilon®-FL膜（0.45 μm）是为荧光免疫检测而开发的。它在多种激发和发射波长范围内的荧光背景都极低。
Immobilon® 转印膜以卷膜和方片膜形式提供。预切好的膜与所有预制胶以及大部分市售的凝胶电泳系统兼容。Immobilon® 转印膜的性质详见表2。表3列出了与最常用的电泳系统相匹配的Immobilon® 预切膜的尺寸。表4列出了与现有的预制胶相匹配的Immobilon® 预切膜的尺寸。
表2. Immobilon® PVDF转印膜的性质和应用。
|
|
Immobilon®-P转印膜 |
Immobilon®-PSQ转印膜 |
Immobilon®-FL转印膜 |
|
描述 |
为结合从各种凝胶基质上转移的蛋白质而优化 |
均一的孔径结构带来分子量<20 kDa的蛋白质的出色结合 |
为荧光免疫检测应用而优化 |
|
组成 |
PVDF |
PVDF |
PVDF |
|
孔径大小 |
0.45 μm |
0.2 μm |
0.45 μm |
|
疏水性 |
疏水 |
疏水 |
疏水 |
|
应用 |
Western印迹 |
低分子量 |
Western印迹 |
|
结合分析 |
Western印迹 |
斑点/狭缝印迹 | |
|
氨基酸分析 |
氨基酸分析 |
荧光免疫检测 | |
|
N端蛋白测序 |
质谱分析 |
| |
|
斑点/狭缝印迹 |
N端蛋白测序 |
| |
|
糖蛋白观察 |
|
| |
|
脂多糖分析 |
|
| |
|
质谱分析 |
|
| |
|
检测方法 |
显色 |
显色 |
荧光 |
|
化学荧光 |
荧光 |
显色 | |
|
化学发光 |
化学荧光 |
化学荧光 | |
|
放射性 |
化学发光 |
化学发光 | |
|
|
放射性 |
| |
|
蛋白质结合能力 |
胰岛素：160 μg/cm2 |
胰岛素：262 μg/cm2 |
胰岛素：155 μg/cm2 |
|
BSA：215 μg/cm2 |
BSA：340 μg/cm2 |
BSA：205 μg/cm2 | |
|
山羊IgG：294 μg/cm2 |
山羊IgG：448 μg/cm2 |
山羊IgG：300 μg/cm2 | |
|
兼容的可逆染料 |
透射法 |
透射法 |
透射法 |
|
丽春红 |
丽春红 |
丽春红 | |
|
CPTS |
CPTS |
CPTS | |
|
甲苯胺蓝 |
甲苯胺蓝 |
Sypro 印迹染料 | |
|
Sypro® 印迹染料 |
Sypro 印迹染料 |
| |
|
兼容的不可逆染料 |
考马斯亮蓝染料 |
考马斯亮蓝染料 |
考马斯亮蓝染料 |
|
氨基黑 |
氨基黑 |
氨基黑 | |
|
印度墨汁 |
印度墨汁 |
| |
|
胶体金 |
胶体金 |
|
表3. Immobilon® PVDF预切转印膜和匹配的电泳系统。
表4. Immobilon® PVDF预切转印膜和匹配的预制胶。
（实际内容以《蛋白质印迹手册》印刷版为准，如有错漏，敬请谅解）
