专家指南：FISH检测之经验谈

宋兰林老师是广州市南方医院的血液科医生，从事FISH实验已有9年时间，积累了丰富的实践经验，这里，她将向我们介绍科室开展FISH实验的情况和她自己的工作心得。

Q：宋老师您好，谢谢您接受我们的访问！请问宋老师从事FISH实验多久了？
A：从2000年到现在，有9年了。

Q：请问宋老师主要做哪些方面的FISH实验呢？
A：主要是血液病方面和产前诊断方面，基本上是间期细胞的FISH检测。

Q：现在每周大概做多少例FISH？
A：每周差不多十几例，包括血液病和产前检测各种类型的都有。

临床应用方面

Q：血液病方面，科室一般对那些病人进行FISH检测？
A：一般诊断为初发白血病，而且有相应探针的，我们都会进行FISH检测。病人初诊为白血病后，我们医院一般要通过4类检查来确定诊断，包括细胞形态学、流式细胞免疫分型、荧光定量PCR、核型和FISH检查。其中FISH和核型检查都是检查细胞染色体变异，我们一般会把两种方法配合一起做。另外FISH也拿来做病程疗效检测用。

Q：一般FISH诊断哪些疾病比较多呢？
A：这都根据病人初诊类型来的，各式各样的都有，一般来说白血病我们用BCR/ABL探针的比较多，产检的话就是常见5种染色体正常。

Q：FISH技术和核型检查为什么要一起做呢？
A：核型技术有它的缺点，像检查需要培养细胞，时间比较长，要3周才能出结果，而且对一些微缺失、断裂点的变异可能就完全看不见，FISH只要3天就能出结果，而且对这些微缺失、断裂点的检测比较有效，检测质量也比较稳定。另外FISH在结果判断上也很明确，有固定的标准。

Q：能不能只做FISH，不做核型检查？
A：目前不行，因为FISH的探针有限，还不能包括所有情况，而且相对FISH，核型检查比较便宜，我们医院一般都是两个一起做。

Q：FISH检测的结果和其它方法检测的结果一致性好不好？
A：挺好的，一般都没什么问题。有时候骨髓形态方面结果不肯定还要来参考我们的检查结果。我们在初发诊断和病程监控都会用到FISH。

Q：FISH检测难度大不大？一般医院容易开展吗？会不会出现做不出结果的情况？
A：FISH这个技术操作是比较简单的，只要有硬件条件，看一次就可以自己回去做了，当然做的过程中碰到问题就要凭经验来解决了，但总的来说不难学。

Q：宋老师你觉得FISH技术应用前景怎么样？好不好普及？
A：FISH这个技术是很好的，学起来也不难，现在的主要问题是价格相对核型检查还比较贵，可能有些人接受起来经济压力比较大，不过有些病人我们尽量推荐他做，毕竟这个结果很有用的，像现在我们医院很多白血病和产检有问题的我们都会建议他做FISH。

硬件配备方面

Q：做FISH的话，硬件方面有什么要求？
A：硬件方面，显微镜要好，要配冷光源CCD的显微镜，这样信号才清楚，另外要配好的图像分析系统，这两样配好后读片子就很容易。另外实验的时候最好用杂交仪做，像我们科室刚开展FISH的时候我就坚持用杂交仪的，这个要比用甲酰胺变性好很多，而且快速安全。

Q：我听说有的老师喜欢在镜下直接读片子？那是在镜下观察好还是在计算机上好？
A：我觉得镜下分析后，再通过CCD采集图像处理更加准确，因为CCD的敏感性肯定比人眼要高啊，可以防止漏掉一些较弱的信号。当然你一定配一个好一点的冷光源CCD，再加上好的图像分析系统的话就能得到一个完美的结果。

Q：宋老师你们这里都是用杂交仪做，但有的地方没有杂交仪也可做FISH，您觉得杂交仪作用大不大？
A：杂交仪还是很重要的，因为变性这个步骤就很重要，如果变性不好就根本杂交不上了，另外你不用杂交仪还要用甲酰胺，这个东西有毒，而且100ml一瓶快200块，用完就扔了，也划不来，最后还有你手工变性第二天甲酰胺洗片的话实验就拖得很长，要很晚才下班。

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实验技术方面

Q：FISH实验中间有哪些要注意的地方？
A：一般来说都不难，可能有几个地方要注意一点，像标本制片的时候就要注意一定要低渗好，然后固定的时候注意细胞要固定干净，探针方面一般没什么问题，但杂交变性的时候一定要充分，不然杂交不上，不过我们一直都是用杂交仪自动变性杂交，所以这方面一般不出问题。最后相应试剂的质量很重要，一定要配好，pH值和离子浓度方面都要注意。

Q：探针方面容易出问题吗？毕竟探针价格是在整个实验中的大头。
A：探针一般都不会出什么问题的，质量都比较稳定。我觉得不同公司的探针差别主要还是染料的问题，像Vysis探针信号比较好，可能主要是因为用的他们的专利染料，序列方面我觉得差别可能不大。

Q：FISH的结果判断容易吗？我觉得核型分析的图可能就比较难判断一些。
A：FISH的结果就是看信号点的数量、融合和分离情况，都很好看的，照着说明书的阳性判别结果就可以了。不过有时候会出现一些说明书上没有的情况，我就经常碰到，但是别人国外已经就这些特别的情况做了研究，在98年的BLOOD上就进行了总结，所以一般都没有什么不好判断的。

Q：如果结果不理想，一般会从哪几个方面分析呢？
A：原因可能很多，要具体分析了，如果是背景很高的话，那可能是细胞数量高，杂质多，或者洗片的时候不充分；如果信号很弱的话，可能是洗片子过头，或者探针有问题，还有就是缓冲液、预处理液这些很重要，如果做不出来很可能是这些试剂配置出了问题。

Q：那种做得不好，看不出结果需要重做的情况多不多？
A：一般都做得出来，除非是我们对结果比较怀疑会自己重做一次看看。

Q：谢谢宋老师接受我们的访问，希望以后有机会能多向宋老师请教。
A：不客气，我也希望能借这个平台和其它的FISH专家多多交流。