创新参选：Tail-PCR技术在昆虫基因侧翼序列克隆中的运用

　　

生物通报道：“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。


参选项目：Tail-PCR技术在昆虫基因侧翼序列克隆中的运用

背景：传统的基因侧翼序列的获得方法如RACE，染色体步移等试剂盒价格高昂，操作繁琐，且对模板质量要求极高。Tail-PCR技术广泛应用于植物基因的启动子克隆，转基因及突变检测，而在昆虫中尚未有报道。

方法改进：不需加接头，不需要酶切，只需合成三条Tm值高于65℃的基因内部巢式特异性引物，以外引物与3’为15个兼并的碱基，5’特异的引物配对进行第一轮PCR。以第一轮PCR产物为模板，进行第二轮巢式PCR反应。琼脂糖凝胶电泳检测第一和第二轮PCR产物，如无明显条带，则以第二轮产物为模板进行第三轮巢式PCR反应。切胶回收单一、明亮的大片段，TA克隆并测序。

结果：采用Tail-PCR方法，扩增得到苹果蠹蛾等多种昆虫多个基因的侧翼序列。该方法操作简单、高效，且成本低廉，可广泛应用于昆虫侧翼序列的克隆。

 

赛默飞特约之生物通2012实验室创新技术评选活动： http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/cxjs-2012/index.htm