Science技术指南：Western Blot新品新技术

　　

生物通报道：自1981年W. Neal Burnette将这种蛋白印迹技术正式命名为“Western Blot”以来，Western Blot已经走过了三十二个春秋了，对于这种用于鉴别特殊蛋白质的技术方法，目前已经涌现出了许多新产品，新技术，用以改善其可重复性，灵敏性，可测性，以及实验速度。为此Science杂志以此为主题，推出了最新一期的技术专题。

工作原理

简单而言，Western blot就是通过凝胶电泳，分离不同大小的蛋白，然后进行转膜（通常是硝化纤维素或PVDF），将滤纸和膜浸泡在缓冲溶液中的方法称为湿转。此后又发展出了干转和半干转移，这两种方法比传统的湿转方法更快，也更规整，但是对于高质量的蛋白而言，效率更低。

对于半干转印方法来说，膜和凝胶被放置在缓冲液浸泡的滤纸之间，加上阳极和阴极，电流就能驱动蛋白转移到膜傻瓜。三种方法中，干法转膜最快，但转印效率也最低。

转膜结束后，进行封闭，再上一抗二抗，进行检测。检测方法通常是化学发光或者荧光方法，前者是通过酶光化学反应，成像设备检测结果，而后者则是通过带有荧光基团的抗体探针进行检测。荧光检测方法的主要优势在于可以同时检测多个蛋白，并且其信号更一致，因此也更有利于量化研究。

目前不少公司都推出了相关设备，软件和消耗品，令Western Blot实验更加简单，更加有效，同时还在实验中加入了一些验证点，从而研究人员能随时监测实验发展，甚至修改实验步骤。

如何加速免疫检测过程

在整个Western Blot实验过程中，转膜，封闭，抗体孵育，洗涤等步骤占据了一大半的时间，因此不少公司围绕这些方法进行了优化。比如EMD Millipore公司推出的SNAP i.d. 2.0系统，就能通过真空驱动技术和内置分流槽，加速转膜过程，而不仅仅是依赖于扩散作用。这一系统能将转膜的四个小时，缩短到30分钟，其Western blotting 产品部经理Michele Hatler表示，“我们确实改善了estern blotting实验进程中的工作效率。各种步骤都是按照传统的方法进行，我们只是加了一个真空。”

最新的2.0版本，是2012年9月推出的，相比于其之前的版本进行了几个方面的改进，比如扩展了应用范围，现在能用于中等大小的凝胶（8.5 cm*13.5 cm）和小型凝胶（7.5 cm*8.4 cm），以前则只能用于小型凝胶。

“这一设备很便宜，操作也很简单，而且切实提高了实验效率，节约了时间”，Hatler说。（SNAP i.d. 2.0系统更详细资料>> >> ）

此外Bio-Rad也推出了一种称为Trans-Blot Turbo的蛋白转移系统，其关键技术点在于其新配方转印缓冲液，以及一种特殊材质的滤纸，这样就能增加电流，使转印更快（推荐使用集成电源），这一系统最快能在三分钟内完成蛋白印迹实验，而典型的半干转印方法通常需要15-60分钟，才能完成一次完成的印迹，并且对于高分子量蛋白而言，结果并不是十分理想。（Trans-Blot Turbo系统更详细资料>> >> ）

 

 

后续文章：增加检测点，更好的定量，重塑WB等……

原文摘选：

LIFE SCIENCE TECHNOLOGIES
Not Your PI's Western Blot
More than three decades after its invention, the Western blot remains a crucial tool for investigators who need to reliably identify specific proteins. A host of recently released products use a variety of approaches to improve the reproducibility, sensitivity, quantifiability, and speed of Western blot experiments.