创新参选：结合两种PCR方法扩增基因全长序列

研究人员采用了一种称为p-PCR的方法，与步降PCR方法结合起来，p-PCR就是锅柄PCR技术（panhandle PCR），这是一种环状PCR技术，由于以5′端已知序列和3′端反向重复序列互补配对形成的锅柄式环状单链为模板，大大增加了扩增的特异性。

　　

“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

参选项目：结合两种PCR方法扩增基因全长序列

背景：对于一些长序列基因，尤其是植物中的一些基因，很难通过PCR方法获得全长序列。

方法改进：我们采用了一种称为p-PCR的方法，与步降PCR方法结合起来，p-PCR就是锅柄PCR技术（panhandle PCR），这是一种环状PCR技术，由于以5′端已知序列和3′端反向重复序列互补配对形成的锅柄式环状单链为模板，而大大增加了扩增的特异性。目前该方法多应用于人类基因组等长启动子的分离。

我们将这种方法与步降PCR方法结合起来，首先设计一段5′端序列与已知序列部分片段反向互补的随机引物， 利用该引物对提取的DNA扩增，获得末端与已知序列部分片段反向互补的DNA子，变性退火后形成锅柄状，然后不经酶切、 加接头等繁琐步骤， 根据步降PCR原理直接进行后续扩增，由此获得了基因全长片段。

 

赛默飞特约之生物通2012实验室创新技术评选活动： http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/cxjs-2012/index.htm