BioTechniques：2013年蛋白质分析文章精选

　　

生物通报道：蛋白质分析一直是生物学中的热点领域。日前，BioTechniques杂志对2013年的蛋白质分析文章进行了盘点，选出了三篇精选文章进行推荐，让我们一起来了解一下吧。

1.       A designed, phase changing RTX-based peptide for efficient bioseparations

在需要进行蛋白分离的时候，纯化往往是最麻烦的步骤。色谱分析法成本最高也最耗费时间，为此，人们开发出了分离蛋白的替代方法，如刺激-应答型标签。在适当的刺激条件下，刺激-应答型标签能实现可逆的蛋白沉淀。这是一种有效的方法，不过这种技术往往需要改变温度或者用特定缓冲液来诱导沉淀。

今年四月，哥伦比亚大学的Scott Banta及其同事发表文章，提出了一个简洁的新型刺激-应答型标签。他们以天然RTX结构域为基础，构建了合成多肽，能够实现温和的钙应答。这种技术的沉淀条件很温和，用蛋白酶切掉标签后，可以获得有活性的纯蛋白。这一技术不仅成本低而且速度快，非常适用于日常研究。

2.       The use of streptavidin conjugates as immunoblot loading controls and mitochondrial markers for use with Dictyostelium discoideum

对哺乳动物蛋白进行免疫印迹（Western blot）定量时用的内参，不适合其他生物，例如盘基网柄菌（Dictyostelium discoideum）。举例来说，在盘基网柄菌的发育过程中，Actin水平变化很大。Davidson等人七月发表的文章解决了这一问题，他们在盘基网柄菌的WB实验中，利用标记的链霉亲和素，检测生物素化的线粒体MCCC1（3-methylcrotonyl-CoA carboxylase α）。研究显示，这是一个有效且方便的标准化工具，可以为许多蛋白分析研究提供帮助。

3.       A rapid and efficient method to purify proteins at replication forks under native conditions

研究复制叉处的蛋白动力学，对于理解DNA的复制和修复非常重要。iPOND (Isolation of Protein On Nascent DNA)是一种捕获复制叉蛋白的重要方法。多伦多大学的Rob Bremner及其同事于今年十月发表文章，提出了能够增加蛋白产量的简化方案aniPOND，进一步推动了蛋白捕获技术的发展。简化方案将细胞膜裂解与胞核收集结合为一步，这样可以减少洗脱步骤，降低样本的损失。aniPOND还采用了更为温和的细胞核裂解方案，来保护DNA-蛋白复合体。研究显示，aniPOND比iPOND更快，还避免了甲醛交联，能够提升蛋白的产量。这样的技术能帮助人们进一步理解，DNA复制和复制叉处的蛋白装配。

 

（生物通编辑：叶予）

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