30分钟 超快速的亚硫酸氢盐转化[新品推荐]

说到甲基化分析，在我的印象中，QIAGEN是比较早推出相关产品的。它的EpiTect Bisulfite Kit可在6小时将DNA序列中未甲基化的胞嘧啶完全转化成尿嘧啶，且手工操作极少。与传统方法相比，算是一大进步。后来，其他厂家也陆陆续续推出了类似产品，速度越来越快。当然，QIAGEN也不甘落后，推出了新一代的产品。

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit能够在30分钟内非常高效地将未甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶，且转化率超过99%。而创新的DNA保护技术能确保高效的DNA变性，但不会降解，获得高的DNA产量和重复的结果。此外，转化后的DNA可在低至10 µl洗脱液中洗脱，产生高浓度的DNA。转化后的DNA适合各种甲基化分析技术，包括各种PCR、亚硫酸氢盐测序、COBRA和焦磷酸测序等。

快速的亚硫酸氢盐转化

试剂盒中的秘密就在于一种高浓度的亚硫酸氢盐溶液，它能够将转化的时间从几小时缩短至30分钟。此外，亚硫酸氢盐热循环程序带来了一系列经过优化的孵育步骤，以便开展DNA变性、磺化和胞嘧啶脱氨基，实现了超过99%的胞嘧啶转化。转化过程的最后一步，脱磺酸基，是在柱上轻松完成的。

DNA保护

在转化过程中，我们通常还要面临一个问题，那就是DNA的降解。因为亚硫酸氢盐处理的剧烈条件，DNA会片段化，从而降低了PCR及后续分析技术的灵敏度。通常，亚硫酸氢盐处理需要大量的起始DNA，以补偿转化过程中的DNA降解和纯化过程中的DNA损失。而对于EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit，其独特配方的DNA Protect Buffer可避免这种DNA片段化。同时，它也实现了有效的DNA变性，产生了足够的单链DNA。DNA Protect Buffer还包含了一种方便的pH指示剂染料，从而保证胞嘧啶转化时正确的pH条件。

针对不同的起始样品，这一产品线又具体分为三个产品：适用于基因组DNA的EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit、适用于FFPE样品的EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit以及适用于全血、细胞或组织的EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit。它们的样品制备有所不同，但之后所有样品类型的DNA亚硫酸氢盐转化都是相同的。大致有以下几步：亚硫酸氢盐介导的未甲基化胞嘧啶的转化，转化后单链DNA与膜结合，洗涤，膜结合DNA的脱磺酸基，洗涤，转化后DNA的洗脱。

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit还包含了将FFPE组织脱蜡和裂解所需的特殊缓冲液。从FFPE组织提取DNA时，不可避免地会发生DNA片段化，而亚硫酸氢盐处理的剧烈条件通常会使情况更糟。而QIAGEN的DNA保护技术尽量减少这一过程中的片段化，让DNA产量更佳。EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit则通过一种创新的裂解缓冲液来处理全血、细胞或组织样品。它可处理0.5-20 µl全血或10-105个细胞（低至60 pg DNA）。

此外，QIAGEN还推出了96孔板形式的快速转化试剂盒——EpiTect Fast 96 Bisulfite Conversion Kit，实现了高通量的DNA转化和纯化。试剂盒也分为三种形式：普通、FFPE和LyseAll。如欲了解甲基化分析方面的更多信息，请点击此处索取。（生物通 余亮）