数字PCR平台上的RNA定量[新品推荐]

之前生物通曾推出了数字PCR专题，并详细介绍了数字PCR的三大平台（地址：http://www.ebiotrade.com/newsf/2012-3/2012314173523798.htm）。文中提到，随着技术的不断发展，数字PCR正变得越来越灵活。它不光可以从基因组DNA或cDNA样品开始，也可以使用RNA作为起始样品。如今，Bio-Rad公司的一步法数字PCR试剂盒新鲜上市啦。

这个名为一步法RT-ddPCR试剂盒（one-step RT-ddPCR kit for probes）的试剂盒让研究人员能够精确灵敏地测定目标RNA分子，应用于基因表达分析、miRNA分析和病毒载量定量等方面。与通常的逆转录之后再对cDNA进行分液不同，如今是先分RNA，再开展逆转录和PCR，一切都在液滴中进行，这减少了手动操作，降低了污染的可能性。

此试剂盒将逆转录反应与微滴式数字PCR结合起来，为RNA的精确定量创造了一个新典范。研究人员可将一步法RT-ddPCR试剂盒与QX100微滴式数字PCR系统结合使用，测定目标RNA拷贝数的微小差异，而在这之前，定量PCR是无法测定的。

它是如何工作的？

一步法RT-ddPCR试剂盒遵循ddPCR流程，只是它的分液对象不是DNA，而是RNA。样品被分成20,000个微滴，而目标和背景RNA被随机分布。在逆转录之后，生成的cDNA被PCR扩增，以便检测目标。每个微滴都带来了一个阳性或阴性的荧光信号，指示目标RNA存在与否。采用微滴分析仪（droplet reader）逐个对每个微滴进行检测，而软件计算出每微升样品中目标RNA的浓度。

与QX100微滴式数字PCR系统联合使用，一步法RT-ddPCR试剂盒让研究人员能够：

• 富集稀有的目标RNA序列
• 检测基因表达水平的微小差异
• 无需标准曲线，确定RNA分子的拷贝数

与传统的微流体数字PCR平台不同，Bio-Rad公司的QX100微滴式数字PCR系统先对样品进行微滴化处理。这样的好处是每个样品可形成20,000个液滴，而其他系统只能分成760-3,000个部分。分得越多，则意味着分析越准确。此产品也被生物通广大读者评为“2011生命科学十大创新产品”之一。（生物通 余亮）

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