聚焦三大数字PCR平台（三）[新品推荐]

Bio-Rad与QX100

dPCR技术继续发展，形成了ddPCR技术。这就是QuantaLife公司开发出的微滴数字PCR技术。该产品还获得了2011年度Frost & Sullivan北美新产品创新奖。2011年10月，Bio-Rad公司收购了QuantaLife和ddPCR技术，推出了QX100微滴式数字PCR系统。

与Fluidigm和Life Technologies不同，Bio-Rad对样品进行微滴化处理。据该公司基因表达部门的销售经理Richard Kurtz介绍，他们的独特优势是能够产生非常均一、重复的1纳升液滴。这样的好处是每个样品形成20,000个液滴，而其他系统只能分成760-3,000个部分。分得越多，则意味着分析越准确。

QX100微滴发生器（droplet generator）将含有核酸分子的反应体系形成成千上万个纳升级的微滴，其中每个微滴或不含待检核酸靶分子，或者含有一个至数个待检核酸靶分子，且每个微滴都作为一个独立的PCR反应器。经PCR扩增后，采用微滴分析仪（droplet reader）逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光信号的微滴判读为0，最终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，分析软件可计算给出待检靶分子的浓度或拷贝数。

对于QX100系统，每个液滴能容纳最多5个目标，这是因为它们能分得更多；这带来了更广的动态检测范围。据介绍，QX100可处理1-100,000个拷贝的样品，而无需在运行之前进行连续稀释。

Bio-Rad公司去年底曾在《Analytical Chemistry》杂志上发表文章，证明了QX100微滴式数字PCR系统在三个方面的作用：拷贝数变异（CNV）研究、稀有等位基因检测和血浆DNA定量。

对于CNV研究，大量的微滴提供了足够的精确度，能准确测定拷贝数状态。利用QX100微滴式数字PCR系统来筛查HapMap样品的CNV，拷贝数状态可完全分辨。对于稀有等位基因的检测，将突变DNA与高度同源的野生型DNA分开，提高了灵敏度。有了QX100系统，研究人员能够检测BRAF V600E中低至0.001%的突变片段，与定量PCR相比，灵敏度提高1000倍。最后，研究人员还利用微滴式数字PCR技术准确检测了孕妇血浆中高度片段化的DNA，这有望应用于无创产前诊断。索取更多资料

结语

随着技术的不断发展，数字PCR正变得越来越灵活。例如，尽管大部分数字PCR流程从基因组DNA或cDNA样品开始，但一些dPCR系统也可使用RNA作为起始样品。对于RNA样品的定量，如基因表达或病毒RNA检测研究，cDNA生成前的处理和逆转录通常需要单独的步骤。这增加了手动操作，并有可能引入污染。为了处理这些组织，Fluidigm开发出了操作步骤，通过整合逆转录反应和检测试剂，能够在现有芯片上检测特定的RNA分子。”此外，Bio-Rad也即将推出一个数字PCR的一步法试剂盒。与逆转录之后再对cDNA进行分液不同，如今也能够先分RNA，再开展逆转录和PCR，这一切都在液滴中进行。

数字PCR的通量也在不断提高，未来，它还有望实现多重分析。专家预计在未来的三五年，它有可能从一个小众技术变成实验室的标准工具。不敢相信吗？生命科学发展如此之快，一切皆有可能。（生物通 余亮）

聚焦三大数字PCR平台（一）

聚焦三大数字PCR平台（二）