创新参选：免疫沉淀的改进方法

　　

“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。
生物通将会陆续公布一些项目，以便大家分享这些创新技术。同时为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通也准备了一些精美礼品寄出，同时近期我们还将进行第二轮抽奖，以飨读者。

 

参选项目：免疫沉淀的改进方法

背景：免疫沉淀是研究蛋白质常用的技术，是利用抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后，再与蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶联的agaose或Sepharose珠子孵育，通过离心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗体-目的蛋白复合物，沉淀经过洗涤后，重悬于电泳上样缓冲液，煮沸5-10min，在高温及还原剂的作用下，抗原与抗体解离，离心收集上清，上清中包括抗体、目的蛋白和少量的杂蛋白。
如果蛋白样品在孵育抗体前未经珠子预处理，会导致一些非特异蛋白与ProteinA/G结合，从而干扰试验结果。另外如果同时加入抗体和珠子，有时会出现沉淀效率不高的情况。

方法改进：

1、预处理：在加入抗体和珠子之前，加入20-30微升50%浓度的珠子悬浮液于蛋白裂解液中，4度摇床孵育一个小时。对于经常做IP或者CO-IP的实验室，可以将同一种样品第一次预处理所用的珠子收集起来置于四度保存，以备下次沉淀同样蛋白裂解液时预处理用。
2、抗体，珠子分别孵育。先将适量抗体加入蛋白裂解液中，4度摇床孵育过夜。然后加入适量珠子，4度摇床孵育2到3个小时。

结果：

 

实验室创新技术火热征集中，五千元金奖等你拿！