2012新品回顾：PCR & qPCR系统[新品推荐]

在PCR方面，2012年最吸引眼球的当属数字PCR了吧。这一技术频繁出现在各大杂志上，也获奖无数。新的平台不断出现，为古老的PCR领域注入了新的活力。今年有哪些新产品上市，它们又应用在哪些方面，且看本文。

数字PCR

随着近两年新平台的不断上市，数字PCR这个概念近来有点火。据估计，数字PCR的复合年均增长率将达90%，有望从2011年的1000万美元增长到2016年的2.5亿美元，可有点猛啊。数字PCR的近亲是定量PCR，两者都能够估计起始样品中的核酸量，但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，而dPCR则让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。

数字PCR使用与qPCR相同的引物和探针，但具有更高的灵敏度和准确性。通常来说，qPCR无法分辨2倍以下的基因表达差异或拷贝数变异，鉴定频率低于1%的等位基因也很困难。相比之下，dPCR能测定30%或以下的基因表达差异，区分变异体到底是五个拷贝还是六个拷贝，还能鉴定频率在千分之一的等位基因。听上去是不是更强大？

生物通在3月份介绍了市场上三大数字PCR平台，它们分别来自Fluidigm、Life Technologies和Bio-Rad。一个月之后，数字PCR的阵营再次扩大。美国RainDance Technologies公司推出了RainDrop™ 数字PCR系统。基于RainDance专利的RainStorm™ 微液滴（picodroplet）技术，RainDrop系统在每个通道能产生100-1000万个皮升大小的液滴，大大超过其他数字PCR系统。

数字PCR在临床研究中的重要性也凸显。Sangamo BioSciences公司的研究人员就将Bio-Rad的QX100微滴式数字PCR系统应用于HIV功能疗法的开发。在两个独立的低拷贝数分析中，实时定量PCR结果显示差异为十倍，让人难以确定数据究竟是实验差异，还是生物学现实。而有了ddPCR技术，结果显示差异为两倍。“这才是我们真正信赖的数据。”

定量PCR

定量PCR虽不像数字PCR那样新品辈出，引人关注，但也还是有看头的。罗氏的LightCycler®家族又添了新成员—LightCycler® 96实时荧光定量PCR仪。该款仪器继承了LightCycler一贯快速，精准的特性，通过全新研发的192根独立光纤同步检测单元，100%消除边缘效应，在荧光PCR上实现了当前最高的光学均一性；经典的银质反应模块，使得温控效果也一样突出，总体来说是一款性价比非常高的设备。Bio-Rad公司近日也推出新的CFX96 Touch深孔板定量PCR检测系统，使反应体积最高可达125 µl。

SYBR Green法实时定量PCR比探针法成本低，使用也更为方便。不过该方法也存在与生俱来的弊端，SYBR Green法产生的非特异性产物较多，会导致高背景和假阳性。如何优化？请看SYBR法实时定量PCR优化指南。

此外，Promega也推出了新型定量PCR试剂GoTaq® qPCR Master Mix。这款试剂采用一种专利的新型双链DNA结合染料（BRYT® Green Dye），能够在进行定量PCR时产生更强的荧光信号，可提高实验数据的准确性和对低表达/低丰度靶标检测的灵敏性。作为升级版的方法，实验时可采用与SYBR® Green I完全相同的设置，无需改变，且与常见的各种Real Time PCR仪器都兼容。

同时，Life Tech也发布了全新一代的SYBR预混液。SYBR® Select Master Mix采用了高度纯化的AmpliTaq® DNA聚合酶，UP (超纯)-利用专利的热启动机制激活，大大提升了特异性。SYBR® Select Master Mix含有SYBR® GreenER™染料，可提供比SYBR® Green I染料更亮的信号且PCR抑制作用更低，可实现高特异性和高灵敏度的DNA、cDNA和RNA定量，达到真正意义上的单拷贝检测。

稀有突变的检测可不是件容易的事，但有了castPCR技术，何惧大海捞针？TaqMan® Mutation Detection Assays是一个高度灵敏且新颖的研究工具，能够检测到隐藏在100万个正常拷贝的背景之下的单个突变分子。这一产品组合涵盖了各种癌基因的重要突变，包括（但不限于）：KRAS、BRAF、HRAS、NRAS、EGFR、PIK3CA、KIT、PTEN和TP53。

多重PCR能够在提高通量的同时节省样品降低成本，它需要耗费更多的时间和精力，同时也会给用户回报更丰富的数据。我们介绍了一些实验技巧和商业化工具，帮助您攻克多重PCR之难。

试剂

在PCR试剂方面，New England Biolabs（NEB）公司推出了一种性能强劲的DNA聚合酶——Q5超保真DNA聚合酶。它不仅带来了极为出色的保真度，还确保了各种扩增子的可靠扩增，而无论其GC含量如何。这种酶适合SNP检测、基因功能研究等应用，尤其适合新一代测序，因为文库制备时的任何偏向都会带来序列拼接的困难，甚至是序列丢失。

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