创新参选：优化检测人Th17细胞的条件

　　

“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。
生物通将会陆续公布一些项目，以便大家分享这些创新技术。同时为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通也准备了一些精美礼品寄出，同时近期我们还将进行第二轮抽奖，以飨读者。

参选项目：优化检测人Th17细胞的条件

背景：Th17细胞是独立的CD4+Th细胞亚群，在自身免疫性疾病等多种疾病中的重要作用被逐渐揭示，临床及科研工作中流式细胞术检测 Th17 细胞的应用将越来越广泛。流式细胞术检测Th17细胞以T淋巴细胞表面表达CD4分子同时细胞内表达细胞因子IL-17为标志，但未激活的Th17细胞内储存的IL-17极微量，所以检测前要利用淋巴细胞激活剂激活Th17细胞，使其产生细胞因子IL-17，再利用蛋白转运抑制剂阻断IL-17向胞外分泌，以使Th17细胞内含有足够量的IL-17以供检测。但在实验过程我们也发现，PMA 刺激培养4 -6小时， 即可导致 T 细胞胞膜 CD4 分子内吞而影响检测，与 Rostaing 等报道一致。提示流式细胞术检测人 Th17 应选择 CD8 设门，即使用 CD3+ CD8-细胞代表 CD3+ CD4+细胞。而既往认为 CD3+ CD8-中可能包含的 NKT、γδT 等细胞影响其代表 CD3+ CD4+亚群。

方法改进： 本研究采用是对CD4做两次标记，分别为不破膜标记和固定及破膜后再标记CD4，把膜内外的CD4进行充分染色。

结果：解决CD4分子内吞问题。避免CD3+ CD8- 细胞代表 CD3+ CD4+细胞的实验误差。

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