显著降低蛋白质样品的复杂度[新品推荐]

Agilent 3100 OFFGEL等电聚焦分离仪助力蛋白质组学研究

Ailent 3100 OFFGEL等电聚焦分离仪是基于等电点在液相环境下分级分离蛋白质或多肽的仪器，它能根据蛋白质或多肽样品的PI对样品进行游离胶预分离，显著降低蛋白质样品的复杂程度，提高后续分析的灵敏度及分辨率。使用3100 OFFGEL分离后，质谱检测出蛋白数是先前的4倍。

蛋白质组的研究不仅能为生命活动规律提供物质基础，也能为众多种疾病机理的阐明及攻克提供理论根据和解决途径。由于基因表达往往是通过基因的转录、表达产生一个蛋白质前体，在此基础上再进行加工、修饰，才成为一个具有生物活性的蛋白质，所以同样的一个基因在不同条件、不同时间和空间可能不只有一种相应的蛋白质，可能会有几种，甚至几十种对应的蛋白质存在。正是蛋白质样品的这种高复杂度和不同蛋白浓度的高差异性，使蛋白质组学研究面临着挑战。

所以，如果能有一种技术，显著降低蛋白质样品的复杂程度，将大大提高蛋白质组学研究的效率。而Agilent 3100 OFFGEL等电聚焦分离仪正是这样一款仪器，它能显著降低蛋白质样品复杂度，提高后续分析的灵敏度及分辨率。

3100 OFFGEL的技术原理

基于等电点在液相环境下分级分离蛋白质或多肽，即蛋白或多肽样品置于IPG（固化PH梯度）胶条上方间隔中（内含缓冲液），在电场作用下，样品在IPG胶条中迁移，逐步等电分离，*终样品保留在上层缓冲液中，可方便的取样进行下一步实验。

如图，实验之前，蛋白或多肽样品直接加到缓冲液中，免去了样品溶入IPG胶条的步骤；
实验结束后，样品保留在溶液中，避免了割胶回收的步骤。

Agilent 3100 OFFGEL的主要作用

在蛋白质组学实验中，Agilent 3100 OFFGEL主要用于对蛋白样品进行基于等电点的预分离，显著降低蛋白样品的复杂度，提高下游检测的灵敏度。蛋白组学研究的三大支撑技术：双向电泳、质谱和计算机图像分析与大规模数据处理技术，后两种技术都可以和Agilent 3100 OFFGEL配合使用，对样品实现预分离。根据所用试剂盒可达到pH 0.1–0.6的分辨率，而且溶液中的分离成分回收，方便了LC/MS分析。

3100 OFFGEL如何配合LC-MS/MS使用？

一般的LC/MS工作流程是:生物样品（细胞、血浆、血清、体液等）裂解——蛋白提取——胰酶消化成肽段（根据需要进行冻干、用甲酸重溶解、纯化等步骤）——3100 OFFGEL（约20h）——液相回收多肽——脱盐——冻干——用甲酸重溶解——上LC-MS——获得的肽段与数据库对比，鉴定肽段（注：1. 蛋白提取后，可以不用胰酶消化，直接上样，相对肽段样品来说回收率低，灵敏度也低；2. 在冻干前是否需要脱盐取决于LC-MS是否有在线脱盐功能）。

3100 OFFGEL的优势有哪些？

1、3100 OFFGEL 可以显著提高MS分析的蛋白检出率

使用OFFGEL分离后，质谱检测出蛋白数是先前的4倍

2、3100 OFFGEL 的蛋白或多肽分离结果具有极好的重复性

 
同一样品用OFFGEL进行3次分离，跑SDS-Page验证OFFGEL分离的重现性

3、3100 OFFGEL的分离结果具有极高的分辨率

3100 OFFGEL的技术特点

• 基于PI的游离胶 预分馏，根据所用试剂盒可达到pH 0.1–0.6的分辨率
• 溶液中的分离成分回收，方便了LC/MS分析
• 两个电源设置允许同时分离两组浓度相差很大的样品
• 一次可同时分馏多达16个样品
• OFFGEL（游离胶）或INGEL（传统IEF）两种模式可选
• 宽范围上样量：50 μg ~ 5 mg
• 高回收率：蛋白＞70%，多肽＞80%
• 开放耗材：多种 IPG-strips可供选择
• 可进行实时“诊断”：通过观察电流变化判断样本的分离情况
• 简便、重现性好、容易使用
• 整合性：可以兼容多个系统完成一系列工作，例如整合MARS, LC/MS, mRP以及生物分析仪等