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基因组纯化之Promega篇 多样化的选择[选购宝典]
【字体： 大 中 小 】 时间：2011年05月26日 来源：生物通
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生物通小编这次就带大家巡一巡众多品牌的基因组DNA纯化产品，并教大家如何挑选适合自己的纯化产品。 第一站是Promega。关于基因组DNA的纯化，Promega提供了丰富的产品。若是一一介绍，恐怕大家看了更晕。那么，生物通先给大家介绍两款经典产品，然后再从不同样品类型入手，并结合样品起始量和通量，分别介绍最新产品。
第一站我们要介绍的是Promega公司。在生物技术这个年轻的领域中，Promega公司进驻中国已有26年的历史，可不是一般的长。而且，相对于其他进口品牌，该公司产品价格亲民。在物价飞涨的今天，这一点更是难能可贵。
回到正题，关于基因组DNA的纯化，Promega提供了丰富的产品。若是一一介绍，恐怕大家看了更晕。那么，生物通先给大家介绍两款经典产品，然后再从不同样品类型入手，并结合样品起始量和通量，分别介绍最新产品。
经典产品之一：Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒
此试剂盒是基于经典的沉淀法，可从全血、组织培养细胞、动物及植物组织、酵母、革兰氏阳性及革兰氏阴性细菌中提取基因组DNA，纯化方法简单、快速。
操作过程也是经典的4步。首先是裂解细胞和细胞核。对于全血的DNA提取，这一步则包括裂解红细胞，接着裂解白细胞和细胞核。如果需要，在这一步可加入RNase消化。接着通过盐沉淀步骤去除胞内蛋白。之后，通过异丙醇沉淀浓缩基因组DNA，并通过乙醇洗涤。纯化得到的DNA可用于扩增反应、限制性酶切消化和膜杂交等多种应用。
这一试剂盒能够胜任多种材料，对样品的起始量要求也很广。以全血为例，低至50 μl，高至10 ml都OK。因此，的确是实验室的不错选择。价格方面，500次（每次300 μl全血）试剂盒的价格为2,742元，单次不到5.5元。
采用Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒从不同起始材料中纯化DNA的产量如下：
|
来源 |
起始样品量 |
DNA产量 |
|
全血 |
300 μl |
5-15 μg |
|
1 ml |
25-50 μg | |
|
10 ml |
250-500 μg | |
|
96孔板，50 μl/孔 |
0.2-0.7 μg | |
|
组织培养细胞 |
106-107细胞 |
5-30 μg |
|
鼠肝 |
11 mg |
15-20 μg |
|
鼠尾 |
0.5 |
10-30 μg |
|
昆虫细胞 |
5×106细胞 |
16 μg |
|
植物叶组织 |
40 mg |
7-12 μg |
|
细菌培养液 |
108-1010细胞 |
5-20 μg |
|
酵母 |
1.9×108细胞 |
4.5-6.5 μg |
经典产品之二：Wizard® Magnetic 96 食品DNA 纯化系统
此系统可从多种天然和加工食物中纯化出DNA，包括谷物种子、谷物粉、大豆、大豆粉和豆奶、薯片、巧克力及含巧克力的食品、蛋黄和植物油等。从这些样品中纯化出的DNA 可用于转基因作物（GMO）的序列测定。
纯化过程使用了MagneSil® 顺磁性颗粒，仅需极少的离心，也不需有机溶剂抽提，快速简便，仅用常规方法1/3 的时间即可完成。此试剂盒的价格为13,203元/400次。
除了这两个经典产品，Promega近几年也推出了不少新产品，可满足你的“三高”要求——纯度高、产量高、通量高。生物通将按照样品类型一一介绍。
组织
我们都知道，若DNA样品有酒精残留，可能会抑制下游的酶解反应。为解决这一问题，Promega推出了ReliaPrep™ 组织基因组DNA小提系统。它提供了完整即用的方法，可从高达25mg组织、1个口腔拭子、或1cm的剪断鼠尾中纯化得到高纯度的gDNA。整个操作过程仅需30分钟或更短，无需酒精洗涤或沉淀即可得到完整的gDNA，适合基因分型、芯片和测序等苛刻应用。
这个试剂盒采用的是柱提法，也是简单的4步。首先破碎起始材料，释放DNA；然后让DNA与ReliaPrep™结合柱结合；利用洗涤液去除杂质；最后是洗脱。不过此洗涤液不同于以往的70%乙醇，也就避免了乙醇残留所带来的问题。此外，系统中的试剂都以即用型提供，无需添加或配制。
血液
Promega提供了ReliaPrep™、Wizard®以及Maxwell® 三个系列的gDNA纯化试剂盒，能够从哪怕最具挑战性的血液样品中提取基因组DNA。前面提到的经典产品Wizard® 基因组DNA纯化试剂盒就能从50 μl–10 ml全血中提取gDNA。
若血液量较少，你还可以试试ReliaPrep™血液基因组DNA小提系统。它的特点同上，无需酒精洗涤，即可从多达200μl血液或体液中始终如一地提取到纯净的完整基因组DNA。基因组DNA可以从新鲜的或冷冻的血液中制备，在不到40分钟内可得到4–10μg的预期DNA产量，当然这取决于血液样品中的白细胞数目。
若血液量较多，ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统则更为合适。它能以规格可调的模式从3-10ml血样中提取基因组DNA。该方法无需繁琐的离心步骤，也无需使用有毒试剂，而这些是沉淀提取法所固有的。ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统已在Hamilton Robotics MICROLAB® STARplus液体处理工作站中实现自动化，可以一次性处理96个样品。对于一次最多32个样品的低通量gDNA提取，可以使用ReliaPrep™ 32 LV HSM的手动模式，由用户手动进行移液。
上面介绍的这些产品大部分采用手动操作来提取gDNA。随着人们对速度、质量的要求不断提高，有些实验室也开始尝试使用自动化的纯化系统。Maxwell® 16仪器便是Promega公司近年来推出的一款纯化仪。
Maxwell® 16仪器可自动纯化高质量DNA、RNA、病毒总核酸和重组蛋白，均衡性好，省时省力，可满足多种下游应用。纯化的介质为顺磁性颗粒，能够实现对目标分子的最佳捕获、洗涤以及洗脱。与传统的硅胶膜方法相比，磁珠带来了更高的结合量和更干净的洗脱。将样品或样品裂解物直接加入预先装有试剂的试剂筒内，即可按“开始”键，启动纯化程序。试剂盒与自动纯化程序均经过优化，能够从特定样品中纯化出最高质量的目标用于下游实验。
Maxwell®16自动纯化仪有两种配置可供选购：用于得到最大产量的SEV (Standard Elution Volume，标准洗脱体积，200-400μl)，和用于得到最高浓度的LEV(Low Elution Volume，低洗脱体积，30-100μl)。此外，SEV和LEV仪器均可配置Flexi Method 固件，用户可以自行构建Maxwell® 16自动纯化仪的程序，做进一步的性能优化。
Maxwell® 16自动纯化仪预置有纯化程序，试剂盒内有预先装有各步骤试剂的条形试剂筒，这些程序与试剂盒最大限度地增加了操作的简便程度。在18-50分钟内（取决于样品的类型），该自动纯化仪可处理1-16个样品。有了Maxwell® 16，你就可以有更多时间去完成其他更具创造性的工作。
目前，Promega提供了以下试剂盒，可用于Maxwell® 16自动纯化仪。
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名称 |
用途 |
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从血液中自动化提取DNA（低洗脱体积） | |
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从血液中自动化提取DNA | |
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从细胞中自动化提取DNA | |
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从组织中自动化提取DNA | |
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从鼠尾中自动化提取DNA | |
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从FFPE样品中自动化提取DNA（低洗脱体积） | |
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从细胞中自动化提取DNA（低洗脱体积） | |
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从血清、血浆或其他样品中自动化提取病毒总核酸 | |
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从口腔拭子中自动化提取DNA | |
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从FFPE样品中自动化提取DNA（低洗脱体积） | |
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从3-10ml血样中提取基因组DNA |
若您对于选择什么样的纯化产品还是心里没底，那么可以登陆Promega英文网站。它上面有个小工具—核酸纯化产品选择器，通过几个简单的问答（如样品量和通量），就可以推荐适合的产品，相当方便。当然，你也可以点击此处索取gDNA纯化的相关资料。（生物通 余亮）
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