年度创新：植物组织直接PCR

参加2011生命科学十大创新产品评选，了解生命科学发展的新动向！植物组织富含多糖、多酚和蛋白等物质，很有可能抑制PCR反应，怎么办？赛默飞世尔派出了Phire热启动 II DNA聚合酶，来对付这些潜在的拖后腿的PCR抑制剂。

　　

DNA提取是许多分子生物学实验的第一步，譬如PCR、克隆和测序。核酸纯化的原始目的是为了去除可能干扰后继反应的杂质，对于PCR技术来说，若是能跳过这一步，直接利用样本进行PCR，那不仅能省钱省力，还能避免交叉污染的风险。由于现在的DNA聚合酶性能已经越来越强大，实验室之间早已流传着各种直接用样品进行PCR的小技巧，不过大多只限于哺乳动物细胞或者细菌类，而甚少涉及植物细胞。

愿望是美好的，现实是残酷的。植物组织富含多糖、多酚和蛋白等物质，很有可能抑制PCR反应，怎么办？赛默飞世尔派出了Phire热启动 II DNA聚合酶，来对付这些潜在的拖后腿的PCR抑制剂。

Phire热启动 II DNA聚合酶是一种特殊的工程酶，融合有DNA 双链结合蛋白，不但聚合能力强，而且对多种植物组织中的PCR 抑制剂表现出超强的抵抗力。有了这员猛将，Phire 植物组织直接PCR试剂盒即可直接从植物样本中扩增DNA，而无需预先进行费时而昂贵的DNA纯化。

此酶是一种特殊的工程酶，融合有DNA 双链结合蛋白，不但聚合能力强，而且对多种植物组织中的PCR 抑制剂表现出超强的抵抗力。有了这员猛将，Phire 植物组织直接PCR试剂盒即可直接从植物样本中扩增DNA，而无需预先进行费时而昂贵的DNA纯化。

无论是新鲜植物还是4ºC贮存或者冻存的植物都可作为模板材料。此外，贮存在诸如Whatman 903® 和FTA® 卡片上的植物材料也可作为模板材料。赛默飞世尔的研究人员还曾用储存于-20ºC 达十年之久的橡树叶片成功进行了直接PCR。

除了DNA聚合酶，Phire植物组织直接PCR试剂盒还包含一整套的优化试剂，制样工具以及对照引物，可以方便地取样和扩增。使用Harris Uni-Core取样器和切片垫取样，可以轻松获得大小均一的样本。取样后，按压活塞将已取到的样本小块直接放入PCR反应液中，开展PCR扩增。

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除了直接PCR，试剂盒还提供了另一种稀释方案可供大家灵活选择。试剂盒中的稀释缓冲液可用于PCR 前的样本处理。若样本较大或很困难，如含有较多纤维或者乳胶成分，可以选择先用稀释缓冲液处理。当扩增子 >1kb 时，使用稀释法是一个不错的选择。另外，这个稀释缓冲液也能储存样本，若需要对一个样本进行多次PCR，可先用其稀释。通常情况下，稀释缓冲液中的DNA样品可在-20ºC 储存几个月。不过，据赛默飞世尔的研究人员介绍，用储存了2年之久的DNA样品进行实验，也得到了很好的结果。

目前，赛默飞世尔已经对多种植物样本进行了测试。下表列出了其中一小部分。用此试剂盒测试过的最新植物样本列表详见：www.finnzymes.com/directpcr。

叶片	·         拟南芥 ·         玉米、水稻、棉花 ·         烟草、葡萄藤
贮存在滤纸上的样本	·         玉米、番茄、豌豆
种子	·         苹果、胡萝卜、南瓜
真菌和藓类	·         稻瘟菌 ·         菌根（杉木根部多个种类） ·         小立碗藓

 

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