年度创新：细胞骨架蛋白富集

参加2011生命科学十大创新产品评选，了解生命科学发展的新动向！要评估肌动蛋白及其相互作用蛋白，药物处理带来细胞骨架的改变，首先要求特异性、温和地制备细胞骨架组分，消除细胞其它成分对检测的干扰。为此，默克密理博新开发上市了两款专门富集细胞骨架的产品。

　　

细胞骨架蛋白（包括肌动蛋白和大量相关蛋白）的变化涉及细胞内物质转运、细胞运动、增殖等重要功能，也是细胞周期调控和癌转移研究中的热点。要评估肌动蛋白及其相互作用蛋白，药物处理带来细胞骨架的改变，首先要求特异性、温和地制备细胞骨架组分，消除细胞其它成分对检测的干扰。

然而，要做到这一点并不容易，因为细胞骨架不溶于传统去污剂（Triton-X100）。多年的研究也表明，许多肌动蛋白调控蛋白/磷酸化蛋白一旦激活，会从可溶的胞质区移动到不溶的细胞骨架。这些重要蛋白不溶，问题就变得棘手，如何研究它们的生化改变，如磷酸化和亚硝基化？

为此，默克密理博新开发上市了两款专门富集细胞骨架的产品。提到蛋白的样品制备，默克密理博可是专家。它旗下的Calbiochem、Novagen和密理博都提供了多个产品，既能专门抽提某一特定组分，例如细胞核蛋白、细胞器（如线粒体）蛋白等，也可借助特殊配方从一批起始材料分步骤地获得胞质/膜/胞核/骨架蛋白的亚细胞蛋白质组抽提等。

ProteoExtract 细胞骨架富集及分离试剂盒（ProteoExtract Cytoskeleton Enrichment and Isolation kit）提供了细胞骨架提取缓冲液，可保留非变性粘着斑和肌动蛋白相关蛋白，并选择性去除可溶的细胞质和核蛋白组分。抽提得到的活性细胞骨架蛋白可用于Western Blot分析，看看某特定蛋白是否出现在细胞骨架组分中，用于蛋白的细胞定位分析。此试剂盒大大提高了低丰度肌动蛋白相关蛋白的检测和研究能力，而之前这些蛋白一般淹没在全细胞裂解液的Western blot中。此产品可用于15次反应。

ProteoExtract 细胞骨架富集及分离试剂盒（ProteoExtract Native Cytoskeleton Enrichment and Staining Kit）温和去除杂蛋白，富集骨架蛋白/相关蛋白，进行原位IF（免疫荧光）染色，大大减少了背景蛋白的干扰。试剂盒中还提供了Vinculin和GAPDH的抗体，便于免疫荧光研究。此产品可用于4个8-well chamber slides实验。

图中展示了未处理以及用ProteoExtract 细胞骨架富集及分离试剂盒处理过的HeLa细胞的共聚焦荧光显微镜图像。(A) 利用TRITC结合的Phalloidin检测F-actin；(B) 用GAPDH抗体和FITC结合的二抗检测细胞质蛋白，这作为阴性对照；(C) 核复染和所有图像叠加。利用ProteoExtract试剂盒，成功去除了可溶的细胞质蛋白组分（GAPDH）。

若想了解细胞骨架富集的更多信息，请点击此处索取资料。（生物通 余亮）