年度创新：FlowSight显微成像流式细胞仪

参加2011生命科学十大创新产品评选，了解生命科学发展的新动向！显微成像观测到的细胞数量太有限、统计学分析太繁琐；而流式细胞术又无法观测细胞形态和结构，无法定位荧光信号到特定部位。大家常想，若是有一台仪器能将两者结合起来，那可就perfect了。如今，这台仪器真的上市了！

　　

细胞生物学研究中，真实的细胞图像是非常宝贵有用的资源。要想获得细胞图像，研究人员就必须使用显微镜进行观察，但显微镜能够观察的细胞数量非常有限，很难提供细胞群体的量化与统计数据。

使用传统的流式细胞检测技术，研究人员可以分析成千上万个细胞，获得每个细胞的散射光信号和荧光信号的数值，从而得到细胞群体的各种统计数据，并找到稀有的细胞亚群。然而，对于研究人员来说传统的流式细胞仪最大的局限性之一在于：细胞只是散点图上的一个点，而不是真实的细胞图像，缺乏细胞形态、细胞结构及亚细胞水平信号分布的相关信息。

显微成像观测到的细胞数量太有限、统计学分析太繁琐；而流式细胞术又无法观测细胞形态和结构，无法定位荧光信号到特定部位。大家常想，若是有一台仪器能将两者结合起来，那可就perfect了。如今，这台仪器真的上市了，它就是美国Amnis公司近日推出的FlowSight显微成像流式细胞仪！且看生物通编辑为您介绍这台创新的兼具显微成像功能的流式细胞仪。

FlowSight显微成像流式细胞仪不仅能够获得大量细胞的群体分析数据，而且还能够实时看到细胞图像，每一步的分析结果都可以通过图像进行确认。这台显微成像流式细胞仪可能会给传统细胞分析带来突破性的变革。

既是流式细胞仪

FlowSight是一款体积小巧，但是功能强大的成像流式细胞仪。该系统革命性的设计提高了信噪比以及荧光检测的灵敏度。标配12个检测通道能够同时获得每个细胞的明场、暗场以及至多10个荧光图像。而且，它功能非常强大，足以胜任核心实验室的应用需要。同时，该系统体积小巧，性价比高，同样也适合小型实验室。FlowSight可以最多配置四根激光管（405, 488, 561, 642 nm），同时还可配置96孔板自动上样系统（AutoSampler）。

又不仅仅是流式细胞仪

FlowSight与其他传统流式细胞仪不同之处在于它带来了每个细胞的真实图像。对于每个细胞，它能够生成12张图片。所获得的图片能够鉴别来自细胞质、细胞膜和细胞核的荧光。您只需点击散点图中的每个点或直方图中的每个bin，即可查看与之对应的细胞图片。因此使用者再也不用靠猜测来判断设门是否准确。在FlowSight中，设门后，使用者可以通过观察所设门内外的细胞图片来确认设门是否准确。

它是如何实现的？

FlowSight技术与传统流式细胞仪很类似，其系统平台也是由液流系统，光学系统和电子系统等三大部分组成。液流系统将样本细胞悬液和系统鞘液注入流动室中，使细胞在鞘液流的约束下聚焦在液流的中心，逐个流过检测窗口。光学系统中光源照射通过检测窗口的细胞，从而产生光信号。光源分为两种，其一用于产生明场细胞图像，另一种是用于产生荧光细胞图像的激光器。光源照射细胞产生的光信号被大数值孔径的物镜收集，然后通过光路系统传递到由二向色镜构成的滤光片堆栈（Dichroic Filter Stack）。光信号在这里被分成不同波段投射到CCD的相应检测通道上，产生一个明场细胞图像，一个暗场细胞图像（Side Scatter，SSC）及至多10个不同荧光通道的细胞图像。FlowSight的光路系统能够自动调整焦距，并实时测定细胞运动速度，而其CCD采用时间延迟积分方式（Time Delay Integration，TDI）进行信号采集，上述这些手段保证了系统采集到的细胞图像的质量。

FlowSight的新颖应用

FlowSight显微成像流式细胞仪结合了流式细胞检测功能与荧光显微成像功能，并整合了功能强大的软件，几乎可应用于细胞分析的所有领域。下面列举一些FlowSight的新颖应用。

1. 细胞周期分析
FlowSight可以将细胞周期分析和有丝分裂细胞分析结合起来。如下图所示，研究人员利用FlowSight对THP-1细胞周期进行分析（如下图左图所示），通过观察每个时期的细胞图片，我们可以对实验结果进行确认（下图右图所示）。

 

2. 八色免疫分型
免疫分型通常用来鉴别血细胞亚群。FlowSight最多能够同时检测10色荧光，最大程度地满足研究者的实验需求。在这个例子中，研究人员用抗CD45, CD14, CD16, CD19, CD3, CD4和 CD123的抗体以及DAPI染料对细胞进行标记。通过一系列设门分析，他们鉴别了以下细胞类群： (A) CD3+ T细胞, CD4+ 辅助T细胞; (B) CD16+ 粒细胞; (C) CD19+ B 细胞; (D) CD14+ 单核细胞; (E) CD123+ pDC/嗜碱性粒细胞.

您瞧，FlowSight革命性的技术，解决了传统流式细胞仪无法获得细胞形态信息的局限，真正让流式细胞仪睁开了“眼睛”，不仅可以对大量细胞进行统计学分析，而且还能观察细胞形态，极大地拓展了传统流式细胞仪的应用。虽然FlowSigh是在今年5月推出的，但是Amnis公司的成像流式技术已经非常成熟，更高性能的ImageStreamX全球装机已经超过100台，也有上百篇文献发表，其中不乏Nature、Science和Blood等高水平文章。

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