专用于小鼠胚胎干细胞的转染试剂-Xfect Stem

　　

细胞转染本非易事，干细胞的转染就更加让人头疼。缺乏安全高效的转染方法，这就像一道坎，横跨在众多干细胞研究人员面前。尽管基于病毒的系统提供了所需的高效性，但病毒载体的构建也不那么简单，需要花费大量的时间和精力，而且安全性的问题也不能不考虑。无疑，非病毒导入系统更安全，譬如阳离子脂质体，目前也应用于大量的体内和体外研究。然而对于原代细胞和胚胎干细胞的转染，常用的阳离子脂质体似乎很难交出一张满意的答卷，效率低，细胞难存活。

为此，Clontech公司推出了一种新型的转染试剂——Xfect™ Stem，专用于小鼠胚胎干细胞的转染。麻省理工大学的科学家曾经筛选了2300多种候选聚合物，鉴定出转染效果杰出的新型可生物降解的纳米颗粒。Clontech购买了MIT的专利许可，并将此次筛选的先导化合物进一步优化，开发出Xfect Stem转染试剂，为外源DNA导入哺乳动物细胞提供了一种高效的新方法。

对于小鼠胚胎干细胞的转染，Xfect Stem表现相当不错。研究人员曾用250 μg Xfect Stem将5 μg DsRed-Express2质粒转染进ES-E14TG2a mES细胞。48小时后，利用流式细胞仪定量分析，转染效率达93.91%。即使在15%血清存在下，Xfect Stem也表现出比其他转染试剂更高的效率，在ES-D3 和ES-E14TG2a中大约为80  5%。更重要的是，上述细胞的转染之后，细胞活力很好，通常达75-90%。

研究人员还特别关心一点，Xfect Stem会不会导致干细胞分化？答案是否定的，它既不会影响mES细胞的克隆形态，也不会导致非特异的分化。开发人员曾在转染48小时后利用实时定量PCR检测了多能标志物（Nanog、Oct4）和分化标志物（Gata6、Brachyury和Map2）的表达水平，并将处理过的样本与未处理的进行比较（图1）。数据表明Xfect Stem不会诱导非特异的分化，或者改变D3 mES细胞的多能状态。

此外，Xfect Stem的兼容性很好，无论是质量好的质粒，还是质量差的质粒，也无论是环状的，还是线性的，均能获得高的转染效率。而转染过程也相当简单（图2），几乎不需要优化。

从各方面看来，Xfect Stem都表现不错，值得干细胞研究人员一试。如果您对此有兴趣，欢迎点击此处索取详细的技术资料或报价。（生物通 余亮）