创新参选:拟南芥转化的简易操作

【字体: 时间:2010年08月23日 来源:生物通

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  “赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出世博会门票一张。

  

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目,这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名,送出世博会门票一张。

热带农科院热带生物所的庞永奇向我们介绍了一种拟南芥转化的简易操作。

背景:拟南芥转化大体分为浸花、喷洒及滴染几种,主要是将农杆菌菌液重悬至一定浓度进行侵染,使用中各有优缺。本人在研究中感觉滴染效果较好,并在实践中做了些简略与细化。

方法改进:摇菌3~5mL过夜,1.5mL管集3mL菌,以1mL渗入缓冲液(1/2 MS大量、5%(W/V)蔗糖、0.02~0.05% silwet L-77)重悬,吸取调好的农杆菌菌液滴于每一簇刚露白的花蕾处。做好标记后直接放回光照培养。一周内对所转植株进行二次重复侵染转化。约两三周会有第一批几个荚成熟,直接取了进行筛选,效果好的话一般可以筛到几株至十几株阳性苗。后续的种子当然也要收着。

结果:一般情况下只需转化2~8株即可筛选获得十几或几十个转基因阳性株系。单株可以分不同侧枝进行,效果也还不错。一定要注意苗的生长状况,温度失控、虫害以及打药都可能造成不利影响。新配的悬浮液浸润效果要好些,浸花时要保证溶液浸入。

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