创新参选：一种可用于多重连接依赖的扩增技术的长探针的制备方法

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票一张。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通已于2010年8月10日进行第二轮抽奖，从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出上海世博会门票一张。

深圳博睿祥晖生物技术有限公司的技术总监胡春凌向我们介绍了一种可用于多重连接依赖的扩增技术的长探针的制备方法。

背景：2002年荷兰科学家发明了一种名为多重连接依赖的扩增技术（muitiplex ligation-dependent probe amplication,MLPA）的高通量基因检测方法，可在同一反应管内对多达45种不同的核苷酸序列进行检测和定量分析。至今，MLPA技术已应用于很多领域，如单核苷酸多态性和基因突变检测、基因片段缺失和重复、染色体数目异常、基因甲基化检测及mRNA分析等等。在该方法中涉及到长探针和短探针，其中长探针的制备是难点。

方法改进：采用PCR方法结合亲和素磁珠法制备（long oligonucleotide preparation by magenetic-beads，LOPM）可用于多重连接依赖的扩增技术的长探针。通过针对目标序列和用于制备长探针的与待检测靶片段无关的模板UT（Unrelated Template，UT），如质粒等设计进行PCR扩增的引物，其中的一个引物标记进行生物素标记，以质粒为模板进行PCR扩增，获得特异长度的生物素标记的核酸序列，利用亲和素磁珠进行纯化，最终制备长度特异的单链寡核苷酸（非生物素标记）。利用亲和素磁珠法制备MLPA长探针的方法如图1。

结果：采用PCR方法结合亲和素磁珠法制备可用于多重连接扩增技术的长探针能根据实验需求制备任意长度的长探针，不仅大大降低了探针设计的难度，同时避免了噬菌体培养和双酶切等耗时长、成本高等复杂的操作过程，使得普通的实验室也能顺利进行MLPA检测实验。

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