创新参选：利用Oligo-dT纤维素和Spin Column 柱纯化mRNA

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年9月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票一张。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通已于2010年8月10日进行第二轮抽奖，从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出上海世博会门票一张。

复旦大学的符薇向我们介绍了如何利用Oligo-dT纤维素和Spin Column 柱纯化mRNA。

参选项目：利用Oligo-dT纤维素和Spin Column 柱纯化mRNA

背景：采用Oligotex 试剂盒纯化总RNA中的mRNA，比较昂贵。Oligo-dT亲和层析柱法可用于分离带polyA尾巴的mRNA，但在洗脱上易出问题，严重影响mRNA的得率和质量，有时rRNA很难除干净，影响下一步实验的效果。

方法改进：本方法采用Oligo-dT纤维素分离带polyA尾巴的mRNA，很好的融入了试剂盒的优点，使填充物Oligo-dT纤维素与总RNA直接接触，有利于两者间的结合，提高了mRNA的得率。由于老的Oligo-dT亲和层析柱法按8mg总RNA/1ml床体积填柱，Oligo-dT用量较大，且回收损失大，其他试剂的用量也相应增加，成本消耗大。

本方法采用Spin Column 柱填充，Oligo-dT用量少，且回收损失少，其他试剂的用量也相应减少，使成本降低约50%以上。每克Oligo-dT纤维素一次可纯化10mg的总RNA，且可反复回收利用十次以上，若按每回收一次损失约10%的Oligo-dT纤维素，则每克 Oligo-dT纤维素最终可纯化 55mg总RNA。由于老的Oligo-dT亲和层析柱法填柱不方便，流速难控制，流速过快影响mRNA质量，流速过慢易污染又浪费时间。本方法很好的融入了试剂盒的优点，采用Spin Column 柱，简单易操作，节约时间，且可通过特殊处理反复使用，成本相对较低。

结果：改进后的方法mRNA的得率几乎接近试剂盒的得率，琼脂糖凝胶电泳显示所得的mRNA中rRNA的含量很低或基本除净。

为你心仪的创新技术投上一票吧！欢迎继续投稿，赢取5000元现金大奖！