创新参选：TUNEL方法的改进

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年8月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票一张。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年8月10日进行第二轮抽奖，从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出上海世博会门票一张。

华东师范大学的张满仓对TUNEL方法进行了一些改进。

参选项目：TUNEL方法的改进

背景：细胞凋亡检测是生物学研究中十分重要的技术，TUNEL就是凋亡检测的可靠方法，它不仅能够定量而且还可以定位研究，尤其适合Whole mount的整体检测，比如斑马鱼、小鼠、鸡的胚胎等。虽然它操作简单、灵敏特异、结果准确可靠。但是价格较贵，尤其是进口的，比如罗氏的50次TUNEL Kit价格五千元左右，另外比起切片和细胞的TUNEL，whole mount的实验中TdT酶混合物有时很难进入组织内部反应。

方法改进：1，对于Whole mount的TUNEL，我们在原Protocol的基础上改动孵育温度和时间，也就是加入酶反应液37度60min孵育改为4度过夜后再在37度孵育30min，这就很好的解决了难以进入部分组织反应的问题，而且可以有效降低背景

2，将标准Protocol的每次50ul反应体系缩减，对于whole mount的胚胎，以完全浸没即可，比如15条斑马鱼胚胎则只需加20ul反应液，将管口用parafilm封闭好即可反应。而对于细胞样品，甲醛固定后，直接在coverslip上滴加10-20ul的反应液，倒扣于干净的载玻片上，湿盒中37度反应60min即可。

结果：Whole mount的结果很理想，如图所示，斑马鱼平台的头部出现特异的凋亡。缩小反应体系和标准反应体系比较无显著差别。

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