创新参选：构建点突变质粒方法的改进

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年7月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票或等值的礼品。

　　

“赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

目前生物通已经公布了一些项目，这些项目也倍受读者的关注。为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通将于2010年7月10日从在此之前投稿的参选者中抽出三名，送出世博会门票或等值的礼品。

北京大学医学部的刘向宇博士对点突变的方法进行了改进，以经济的产品组合替代了昂贵的试剂盒。

参选项目：构建点突变质粒方法的改进

背景：在进行生物化学实验研究过程中，为了研究目的分子上某些特定位点对于该分子功能的影响，我们常常将这个位点进行突变，并将野生型质粒和突变型质粒的各种生理生化性质进行比较从而推测这个点的功能。通常情况下我们构建点突变质粒用的是stratagene公司的点突变试剂盒，根据该公司报价，货号为200515的点突变试剂盒价格为6112元，能做10个反应。

方法改进：其实构建点突变最重要的是使用的聚合酶的保真性，在我本人实际操作过程中，不需要使用价格高昂的试剂盒，只需要定制takara公司的primestar（125U， 450元），neb的DPN1（500U,319元）,天根的 DH5a（20支，290元）（报价均来自公司网站），点突变引物的设计还是遵循试剂盒中的原则，这样在构建多个点突变时可以大大缩减成本，而且成功率不比用试剂盒差。primestar具有较高的保真性，在我构建的质粒中有达到8kb的质粒，同样能够构建点突变成功。如果碰到primestar不好用，也可以单独定制stratagene公司的PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase(1000元左右)，效果会更好，成本还是大大降低。

结果：本人构建的一个四个赖氨酸联合点突变为精氨酸的质粒片段

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