创新参选：让基因表达芯片重复使用

　　2010实验室创新技术大奖评选活动开展半月以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目。不看不知道，原来大家在实验中还有这么多小技巧，小创意。从今天开始，生物通将刊登参选项目，与读者分享。如果您的实验也有类似的改进或者从其它媒体处学习到一些改进，别犹豫，赶快参选。无论是小改进，还是大创意，我们都欢迎。

据中山大学的赵博士推荐，基因表达芯片也能通过一些简单的操作而重复使用。

项目：让基因表达芯片重复使用

背景：芯片是一种高通量分析基因表达的有力工具。然而，芯片价格高，且需要重复实验来获得有意义的统计显著性，这些限制了它们的应用。为了解决这些问题，我们应用了一种基于RNase H的剥离技术，从而降低了每个芯片的费用。

方法改进：我们培养了HUVEC细胞，并利用RNA提取试剂分离出总RNA。RNA经扩增、标记和纯化后，分为三份，用于后续的杂交。RNA片段化之后，750 ng Cy-5标记的HUVEC RNA和Cy-3标记的参考RNA在65°C与人基因组寡核苷酸芯片杂交。芯片过夜孵育，然后洗涤。

在500 μl第一链缓冲液中加入100 U RNase H，配制成剥离缓冲液，并加入用过的芯片中。芯片在37°C过夜孵育，转动速率为4 rpm。RNA降解之后，在55°C孵育30分钟，灭活RNase H，然后洗涤并空气干燥。剥离后的玻片放置在暗处，留待后用。

结果：经过多次实验，我们发现，经过RNase H的剥离处理，结合的RNA能被完全洗脱。第一次及剥离后再次使用的芯片上的基因表达谱相似，且背景无显著增加。

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