创新参选：直接用标本保存液来开展PCR

　　

2010实验室创新技术大奖评选活动开展半月以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目。不看不知道，原来大家在实验中还有这么多小技巧，小创意。从今天开始，生物通将刊登参选项目，与读者分享。如果您的实验也有类似的改进，别犹豫，赶快参选。无论是小改进，还是大创意，我们都欢迎。

据华南农业大学的刘博士介绍，有些标本无需经过DNA纯化这一步，就能直接用标本保存液来开展PCR。

项目：跳过DNA提取，直接用标本保存液来开展PCR

背景：DNA提取是许多分子生物学实验的第一步，譬如PCR、克隆和测序。然而，现代的PCR酶如此强大，让我们有些怀疑这一步是否必需。研究表明有少量的DNA会从组织渗漏到保存液（通常为酒精）中，也许这部分DNA恰好能被标准的PCR步骤所扩增。于是，我们检验了这种方法的可行性。

方法改进：我们使用了含有蝴蝶幼虫的酒精。取50 ml酒精放在56°C恒温箱中挥发，将残留物溶解在50 µL纯水中。将此溶液上样到Qiagen MinElute离心柱上，以去除PCR抑制剂，之后DNA重新溶解在50 µL水中。

我们还将类似的方法使用在新鲜采集的标本和保存在95%乙醇中的旧标本（昆虫和植物叶片）中。新鲜的标本放置在2 ml 95%乙醇中。24小时后，将1ml乙醇转移至新管中，并让乙醇在56°C挥发约30分钟。对于保存在95%乙醇中的标本，我们使用1ml乙醇防腐剂作为起始材料，在56°C挥发。残留的DNA溶解在30 µL纯水中。对于所有样品，我们取2 µL DNA溶液，进行随后的PCR扩增。

我们使用标准的条件和引物，从酒精样品中扩增出130 bp和658 bp的细胞色素C氧化酶1（CO1）片段。我们还从新鲜采集的昆虫标本中扩增出核糖体28S rDNA，从所有植物标本中扩增出rbcL的部分片段。利用直接从95%乙醇中获得的DNA，我们成功扩增了动物CO1（25/25）和28S rDNA（24/25），以及植物rbcL（45/45）。

结果：我们的结果表明DNA提取并非必需，残留在保存液中的DNA可通过一个简单的PCR反应来稳定扩增。

赛默飞世尔特约之2010实验室创新技术大奖评选活动火热进行中，五千元金奖等你拿！