加速昆虫细胞中的蛋白表达[新品推荐]

利用环状病毒骨架而非传统的三切线性病毒骨架与重组质粒共转染，提高了转染效率和重组效率，达到100%重组，无需噬斑筛选，7-10天获得重组病毒颗粒。并对杆状病毒骨架进行了修饰，删除了多种非必须基因，对于目的蛋白在细胞内累积和分泌蛋白表达有很大帮助作用，从而提高目的蛋白的表达量。

对于需要活性蛋白的研究人员而言，昆虫细胞不失为一个比较好的选择。多年来，人们主要采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中生产重组蛋白。然而，制备重组杆状病毒也是一个相当麻烦且耗时的过程。就算实验很顺利，也要前前后后忙碌一个月，才能看到结果。实验不顺利的时候就更别提了，还得郁闷几个月。

为了加速昆虫细胞的表达过程，默克旗下的表达专家Novagen最近推出了BacMagic™系统，一种改进型的杆状病毒方法。通过这种简化的方法，无需噬斑筛选，7-10天获得重组病毒颗粒，一路欢歌到纯化……

BacMagic DNA是一种改造的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcNPV）基因组，其中关键的病毒基因ORF 1629的一部分已删除，且用细菌人工染色体（BAC）代替了多角体编码区。ORF 1629的删除是为了防止非重组病毒在昆虫细胞中复制，而BAC允许亲本病毒DNA在细菌中以环状DNA增殖。

目的基因和启动子由转移载体携带。利用Insect GeneJuice转染试剂将转移载体、BacMagic DNA共转染进入昆虫细胞。在同源重组之后，ORF1629的功能重建，且目的基因取代了BAC序列（下图）。只有重组杆状病毒才能在昆虫细胞中复制，亲本病毒无法复制，因此也就不需要噬斑纯化，节省了至少10天。

BacMagic DNA的选择有三种。BacMagic-1 DNA删除了非必需的病毒几丁质酶基因（chiA），能改善分泌效率，从而大大提高分泌或膜定位重组蛋白的产量。BacMagic-2 DNA除了删除chiA基因，还删除了一种v-cath蛋白酶基因，使大部分目的蛋白的质量和产量都显著提高。BacMagic-3 DNA在此基础上，还删除了三个病毒基因（p10、p24和p26）。这些基因是非必需的，它们的删除能改善蛋白表达。

转移载体的选择则更多，如双系统穿梭载体pBAC™ 同时用于原核和昆虫表达、三系统穿梭载体pTriEx™ 同时用于原核，昆虫和哺乳动物细胞表达。另外，默克还新推出了pIEx/Bac双功能载体，能同时用于瞬时转染早期表达和重组病毒晚期表达，便于筛选合适的表达系统。

BacMagic™ DNA Kit中包含了BacMagic™ DNA，昆虫细胞专用的Insect GeneJuice转染试剂以及转染对照质粒。如果你们实验室刚刚开始做昆虫表达，那么可以选择BacMagic™ Transfection Kit，它除了上述组分外，还包含了Sf9昆虫细胞及培养基。

关于更多的昆虫表达产品及载体选择指南，请下载《昆虫表达系统手册》（PDF）（1.5 MB）

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