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TaqMan探针基因表达分析全面升级[新品推荐]
【字体: 大 中 小 】 时间:2010年12月17日 来源:QIAGEN
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QIAGEN 全新发布的TaqMan引物探针 — QuantiFast Probe Assays就特别考虑到了<100 nt的RNA模板,经过QIAGEN独特的设计体系, 这些降解的RNA模板也能够被检测到,这对于FFPE样品的基因表达分析非常关键。而QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit则是全球首个整合了gDNA去除功能的荧光定量RT-PCR试剂盒。
TaqMan探针对于大家来说不是什么新名词了,然而你知道吗,对于部分降解的RNA,如福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)样品中的RNA,TaqMan引物探针的设计有更多的讲究,你知道这是为什么吗?
FFPE样本在固定时导致核酸相互交联且片段化,RNA片段的大小在50-300 nt,大部分片段在100 nt左右,这些没有3’端的RNA不能使用oligo-dT来逆转录,如用随机引物大量非目标RNA模板(如tRNA, rRNA)产生的cDNA又影响了目标RNA片段检测的灵敏度,因此最好是使用特异性引物。在引物探针设计时就需要特别考虑扩增片段不能太长,否则那些降解的RNA片段无法被检测到,导致得到的结果不准确。
QIAGEN 全新发布的TaqMan引物探针 — QuantiFast Probe Assays就特别考虑到了<100 nt的RNA模板,经过QIAGEN独特的设计体系, 这些降解的RNA模板也能够被检测到,这对于FFPE样品的基因表达分析非常关键。因此,相比较普通的TaqMan探针,QuantiFast Probe Assays能够更灵敏地检测到降解的RNA模板,分析结果更可靠。QuantiFast Probe Assays目前涵盖人、小鼠和大鼠的所有的基因,包含一对预混合的引物和一条TaqMan探针。有两种染料标记可供选择:FAM(适合所有基因)和MAX(适合特定的参考基因)。
另外由于FFPE样品中的核酸高度片段化且相互交联,抽提得到的RNA中有较多的基因组DNA片段残留,这些残留的gDNA也会被扩增出来,严重影响了基因表达分析结果的真实性。
QIAGEN 全新发布的探针法检测试剂盒 —QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit解决了gDNA干扰的问题,这是全球首个整合了gDNA去除功能的荧光定量RT-PCR试剂盒。它包含了独特的gDNA去除缓冲液, 只需要扩增前在室温下经过5-10分钟的孵育即可去除gDNA,非常方便地解决了各种样品尤其是FFPE样品中gDNA残留的问题。而且,QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit还整合了几项QIAGEN在real-time RT-PCR试剂上的创新:
当然,此试剂秉承了QIAGEN 快速real-time RT-PCR试剂盒一贯使用的热启动Taq酶HotStar Taq plus及K+、NH4+缓冲液体系,提高了结果的特异性和灵敏度。逆转录使用了Omniscript和Sensicript两种逆转录酶的混合,无论是高丰度或低丰度的RNA模板都能高效地逆转录。
将QuantiFast Probe Assays和QuantiFast Probe RT-PCR Plus Kit配合使用,再加上QIAGEN在核酸纯化领域提供的各种优化方案,无论是遇到什么种类的样品,即便是FFPE样品,基因表达分析都可以轻松应对了。
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