为Western blot注入新活力[选购宝典]

Western blot虽然是个老话题，但不时也会散发出新的活力。近红外染料标记的抗体为印迹形式增添了灵活性。这些抗体能够更准确地定量，线性范围比化学发光更宽，超过4个数量级。Pierce也推出了快速半干式转印仪，与Pierce的快速半干式转移缓冲液共同使用，7-10分钟内就能完成高效的蛋白转印。

Western blot总是离不开一对抗体兄弟——蛋白特异的一抗和物种特异的二抗。至于二抗上的标记，过去以辣根过氧化物酶居多。辣根过氧化物酶与显色底物相互作用，在膜上显出肉眼可见的条带。这种分析简单、灵敏，应用广泛，但是它不能定量。化学发光法的灵敏度更佳，且动力学范围更大，利于定量。但它的缺陷是信号很短暂，所有研究都必须在有限的时间内完成。

许多实验室现在开始对荧光标记的抗体表现出浓厚的兴趣。这种抗体能够直接检测，灵敏度高，且信号持久。绿色、红色的抗体已不稀奇，LI-COR公司还提供近红外染料结合的IRDye® 二抗，荧光发射波长分别为680 nm和800 nm。这样就能同时检测两个蛋白，而不需要剥离、再孵育。这些抗体能够更准确地定量，线性范围比化学发光更宽，超过4个数量级。近红外范围的背景低，信噪比更高。而且这些标记特别稳定，能保持好几年。

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近红外染料标记的抗体为印迹形式增添了灵活性。LI-COR的产品经理Tony Endozo谈到：“我们的用户非常具有创新性。主要的应用当然是Western blot，不过我们还可以进行细胞分析，In-Cell Western，在整个细胞的背景下分析目的蛋白。”这个过程包括培养细胞，然后直接放在板上分析，而不需要裂解细胞或变性蛋白。In-Cell Western很容易扩大到96或384孔板的高通量分析。另外，LI-COR还提供了Chemi-IR试剂，它结合了化学发光的HRP步骤和IRDye检测系统，将它们的优势合二为一。

转印仪器上同样有新选择。Pierce（Thermo Fisher Scientific）推出了快速半干式转印仪，能够迅速将蛋白或核酸从凝胶上转移至PVDF或硝酸纤维素膜上。与Pierce的快速半干式转移缓冲液共同使用，能在7-10分钟内完成高效的蛋白转印，与传统的45分钟相比，真是快了一大截。快速半干式转印的主要优势在于缓冲液消耗量减少，电场更均匀，转移效率高，时间更快。Pierce快速半干式转印仪一次能转4块mini-gel，通量比其他方法更高。当然，这个仪器也能进行传统的半干式转印，用你自己的缓冲液和protocol。想了解更多吗？请点击此处。

Pierce快速半干式转移缓冲液的配方经过优化，适于快速的转移。它是10×的配方，使用前用超纯水稀释即可，也无需加入甲醇，更安全。它适用于大部分SDS-PAGE的凝胶，包括Tris-甘氨酸、Bis-Tris、Tris-HEPES和Tris-HCl。

Invitrogen在几个月前也推出了iBlot Western检测试剂盒，它与iBlot干转仪搭档，能将western检测从3小时缩短到25分钟。详细请看：25分钟完成Western检测？！看来，时间也不再是Western blot最大的纠结了。

（生物通 余亮）