在活细胞内实时观察细胞周期[新品推荐]

2008年，日本科学家Miyawaki等开发出荧光泛素化细胞周期指示剂（缩写为FUCCI），这是一种基于荧光蛋白的探针，它将红色荧光蛋白（RFP）和绿色荧光蛋白（GFP）与不同的细胞周期因子Cdt1和geminin融合。Invitrogen将上述研究成果商业化，并结合了强大的BacMam基因导入系统，开发出使用更为方便的Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor。

2008年，日本科学家Miyawaki等开发出荧光泛素化细胞周期指示剂（缩写为FUCCI），这是一种基于荧光蛋白的探针，它将红色荧光蛋白（RFP）和绿色荧光蛋白（GFP）与不同的细胞周期因子Cdt1和geminin融合。这样，Cdt1和geminin就被泛素连接酶E3泛素化，继而降解。泛素连接酶的时间调节产生了Cdt1和geminin的双相周期。

在G1期，geminin降解，只能看到带有RFP的Cdt1，因此G1期的细胞显示出红色荧光核。在S、G2和M期，Cdt1降解，只剩下带GFP的geminin，因此细胞核呈绿色荧光。在G1/S过渡期，随着Cdt1水平下降和geminin水平升高，两种蛋白都存在，绿色和红色的叠加产生黄色荧光。红色-黄色-绿色，这种动态的颜色变化呈现出细胞周期和分裂的过程。

Invitrogen将上述研究成果商业化，并结合了强大的BacMam基因导入系统，开发出使用更为方便的Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor。这种预包装的试剂是即用的，避免了纯化质粒的麻烦，也省去了脂质体等转染试剂。

BacMam生物通以前介绍过，是一种改造过的杆状病毒，能将荧光蛋白导入胞内，不仅适合多种细胞类型，包括原代细胞和神经细胞，而且无明显的细胞毒性。另外优化起来也相当容易，只需增加或减少病毒就能控制表达水平。到目前为止，已有90多种细胞类型经过实验，可被BacMam技术有效转导，不过造血细胞和巨噬细胞除外。想要了解BacMam适用的细胞列表，请登陆http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Drug-Discovery/Target-and-Lead-Identification-and-Validation/Pathway-Biology/cellular-pathway-analysis/bacmam-system/bacmam-compatible-cells.html。

整个流程也很简单：在细胞中加入试剂，放置1-2小时，再用BacMam增强剂（试剂盒中已提供）处理1-2小时。洗涤后过夜孵育，让荧光蛋白表达，然后就可以利用传统的荧光显微镜观察细胞周期了。

Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor可用于细胞周期进程的成像，并可评估药物、siRNA或其他因素对细胞周期的影响。Cdt1-RFP和geminin-GFP的荧光可耐受4%甲醛的固定及0.1% Triton X-100的通透处理，因此标记后的细胞可用抗体等来处理。如果你想了解此产品的更多信息，请点击索取。（生物通 薄荷）