一种不用液氮研磨,快速制备各种组织基因组DNA并进行PCR方法[新品推荐]

【字体: 时间:2009年10月27日 来源:Tiangen

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  采用独特创新的缓冲体系,本方法包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂,适用于从植物组织、植物种子、动物组织/细胞、细菌和血液等材料中一步法提取基因组DNA并用于PCR扩增。

摘要:

创新的溶液配方,实验样本无需液氮研磨,仅10mg样本一步裂解20分钟即可获得各种组织基因组DNA并进行PCR实验,提速基因组DNA提取与PCR实验进程!

采用独特创新的缓冲体系,Tiangen公司的快速DNA提取扩增套装包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂,适用于从植物组织、植物种子、动物组织/细胞、细菌和血液等材料中一步法提取基因组DNA并用于PCR扩增。整个提取过程无需液氮研磨,无需有机溶剂抽提,无需乙醇沉淀,具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点,特别适合于高通量的筛选如转基因、基因检测等快速检测与筛选。

特点与优势:

  • 简单快速:无需液氮研磨,一步裂解20分钟可以提取到各种植物组织DNA并进行PCR实验; 
  • 应用广泛:适用各种植物叶片、植物种子、动物组织/细胞、细菌和血液等; 
  • 安全无毒:无需酚、氯仿等有机溶剂抽提,无需无水乙醇沉淀;
  • 样本量少:只需10mg样本量,对于样本量少的实验非常适合;
  • 功能强大:试剂盒包含了快速制备基因组DNA和PCR扩增的所有试剂;

实验例:(提取各种材料DNA,并应用各自特异引物进行PCR扩增结果)

1、应用植物材料:

取10mg玉米、大豆、水稻的叶片和种子材料分别进行DNA提取扩增实验,图片为以快速DNA提取扩增套装提取的DNA为模板分别用玉米(zein基因)、大豆(lectin基因)、水稻(第12条染色体的694bp片段)的相应特异引物进行PCR实验后,5ul PCR产物的琼脂糖电泳结果,并用离心柱型植物基因组试剂盒提取DNA的扩增结果做阳性对照;
M:marker
1:叶片材料
2:种子材料
P:阳性对照

2、应用动物材料:

取10mg大鼠鼠尾进行DNA提取与PCR扩增实验,并做2个实验重复,用大鼠β-Actin引物进行PCR实验后,5ul PCR产物的琼脂糖电泳结果,并用离心柱型动物组织基因组试剂盒提取DNA做扩增阳性对照;
M:marker
P:阳性对照

3、应用细菌材料:

取200ul培养金黄葡萄球菌和大肠杆菌材料分别进行DNA提取和PCR扩增实验,每个材料均做4个实验重复,用16s rDNA引物进行PCR实验后,5ul PCR产物的琼脂糖电泳结果,并用以无菌水做扩增阴性对照;
M:marker
positive:金黄葡萄球菌
negative:大肠杆菌
NTC:阴性对照

当前,基因组DNA提取大都采用传统的CTAB+酚氯仿方法(植物样本常用方法)或SDS+酚氯仿方法(动物样本常用方法)等提取方法,传统的酚氯仿抽提方法有着操作步骤繁琐、操作复杂及耗时较长、使用的酚氯仿等有机溶剂有着污染环境和危害实验人员健康甚至具有高度的致癌风险,另外,传统提取方法所提取出来的DNA常含有较多的蛋白残留、多糖的污染、酚类物质的污染(如DNA为褐色)是提取基因组DNA 时常遇到的非常棘手的问题,而蛋白、多糖和酚类等杂质对后续的酶切、PCR反应等下游实验有较强的抑制作用。快速DNA提取扩增套装提供的方法制备基因组DNA快速简便,大大缩短了抽提基因组DNA时间,而且研究表明各种,本方法从植物叶片,种子,细菌,到动物组织各种材料提取基因组DNA后续PCR效果和重复性均较好,同时,方法所需要材料量仅10mg,特别适合于高通量的筛选如转基因、基因检测等快速检测与筛选,大大缩短检测时间,提速检测进程。

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