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远离EB和紫外,检测核酸有没有更好的选择?[新品推荐]
【字体: 大 中 小 】 时间:2009年10月13日 来源:生物通
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UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍……
话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR类染料在紫外下不稳定,容易降解,一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低,但是价格却不亲民——核酸染色成像这样的活,哪个分子生物学实验室不是每天3,4次啊。
想要避免EB的影响,又不想影响实验的效果,许多实验人员常陷入两难中,另一方面,经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像,在这种波长下,EB的灵敏度和价格都是比较合适的,而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点,所以导致了虽然知道EB的有害性,但许多实验室还是采用EB染料的现状。
国内生物技术自主研发著名企业:百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。
这种凝胶透射仪:UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。
这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点,通过共轭链长度的调节,花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区,采用红区测量可有效地排除背景干扰,获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感,非常适合生物及环境样品的分析研究。
除此之外,UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料,比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白(EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统,而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照,从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代,可以拍出多姿多彩的电泳图片来。
UltraPowerTM可见光凝胶透射仪具体特点见下:
1. 可见光激发 避免传统紫外激发时有可能对核酸样品造成的诱变和损伤,以至于克隆效率低下,甚至表达蛋白错误;
2. 实验操作安全 在非紫外的可见光下操作,实验操作人员更安全,真正杜绝了紫外对人皮肤的伤害;
3. 切胶方便,不用暗箱 配备本公司自主研发的特质观察镜,既可清晰地分辨电泳条带,又能彻底摆脱传统切胶回收时空间狭小,操作不便的弊端(图1);
4. 数码相机拍照,多彩亮丽 拍照更简便,效果更清晰;从此告别高昂造价的黑白CCD时代,普通数码相机就可拍出多姿多彩的电泳图片来(图2);
5. 灵敏度更高 和传统紫外激发的EB染色相比,该产品和配套染料的灵敏度要高出8-20倍,能检测低至0.1ul的DL2000(相当于100pg)(图3、4、5)。
附表:
常用荧光染料波长及与UltraPowerTM可见光凝胶透射仪的适用性
名称 |
激发/发射波长 |
适用性 |
SYBR Green I |
498/522 |
好 |
SYBR Gold |
495/540 |
好 |
SYPRO Orange |
475/580 |
好 |
SYPRO Red |
545/635 |
中 |
黄色荧光蛋白(EYFP) |
515/530 |
好 |
绿色荧光蛋白(EYFP) |
490/510 |
好 |
伊红(Eosin) |
525/546 |
中 |
荧光素(Fluorescein) |
495/525 |
好 |
GelStar |
495/530 |
好 |
荧光黄(Lucifer yellow) |
428/544 |
好 |
光神霉素(Mithramycin) |
457/570 |
好 |
NBD |
476/538 |
好 |
Pyronin Y |
488/580 |
好 |
Rhodamine 123 |
560/620 |
中 |
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