克隆研究重大突破：冷冻小鼠的健康克隆体

　　

生物通报道：来自日本理研所（RIKEN）发育生物学中心，东京慈惠大学（Jikei University）的研究人员报道了一种可以用在零下20摄氏度保存了16年的小鼠尸体培育出活的克隆鼠的技术。这一技术不需要一个完整的供体细胞，因此可能可以用于已灭绝的哺乳动物的冷冻残骸的进一步研究。这一研究成果公布在11月3日的《美国国家科学院院刊》（PNAS）杂志上。

领导这一研究的就是第一位克隆出小鼠的科学家Teruhiko Wakayama，他与其它两位科学家在1997年宣布成功用成年鼠的体细胞培育出了第三代共50多只克隆鼠。并且运用的技术是Wakayama业余时间发明的Honolulu技术，这种技术比用于克隆多莉的技术更加先进和有效。

Honolulu技术简单而言就就是将细胞核从捐赠细胞植入去核的卵细胞之后，把细胞置于化学溶液中浸泡5个小时左右，以刺激细胞生长，这样成功率比Ian Wilmut的高——前者为百分之三，后者为两百七十七分之一，由于honolulu方法中使用的化学溶液对细胞造成的伤害比电击少，因此，这样获得克隆后代能正常的生产，证明克隆动物是具有生殖能力的。

在这篇文章中，研究人员将冷冻的小鼠解冻之后，从脑组织的死亡细胞里收集了细胞核，把细胞核植入到一个空细胞从而产生了克隆胚胎。然后用克隆胚胎培育出了胚胎干细胞系，这样得到了12个健康的克隆小鼠。

一般而言，目前的克隆技术需要两个活的完整细胞，一个作为捐赠细胞，另一个用于接纳转入的DNA，这两个细胞都必需具有活性，不能使用冷冻细胞，因为科学家们认为被冷冻细胞中形成的冰晶将会破坏DNA以及细胞本身，因此阻止了成功的复制。

然而在这项研究中，研究人员利用的是冷冻动物的大脑细胞，他们认为大脑的高脂肪以及头骨可以有效地保护脑细胞，减小被冰晶破坏的可能性，结果获得健康的克隆小鼠。研究人员也指出从其它冷冻器官中提取的细胞核也可能用于培育可存活的胚胎，但是比来自脑细胞的细胞核的成功率低得多。

这一研究成果证明核转移技术可以用于“复活”动物，或保存有价值的基因组。

英国《每日邮报》报道称，虽然科学家们已经在异种克隆方面做了很多工作，但是无法从初期实验的顺利进展中推断是否能最终获得圆满的结果，迄今为止还未成功通过这种方法复制动物。

（生物通：张迪）

原文摘要：

Production of healthy cloned mice from bodies frozen at －20°C for 16 years

Cloning animals by nuclear transfer provides an opportunity to preserve endangered mammalian species. However, it has been suggested that the “resurrection” of frozen extinct species (such as the woolly mammoth) is impracticable, as no live cells are available, and the genomic material that remains is inevitably degraded. Here we report production of cloned mice from bodies kept frozen at −20 °C for up to 16 years without any cryoprotection. As all of the cells were ruptured after thawing, we used a modified cloning method and examined nuclei from several organs for use in nuclear transfer attempts. Using brain nuclei as nuclear donors, we established embryonic stem cell lines from the cloned embryos. Healthy cloned mice were then produced from these nuclear transferred embryonic stem cells by serial nuclear transfer. Thus, nuclear transfer techniques could be used to “resurrect” animals or maintain valuable genomic stocks from tissues frozen for prolonged periods without any cryopreservation.

附：

中国克隆发展史

　　60年代 生物学家童第周对金鱼、鲫鱼进行细胞核移植
　　1990年5月 西北农业大学畜牧所克隆一只山羊
　　1992年 江苏农科院克隆一只兔子
　　1993年 中科院发育生物学研究所与扬州大学农学院合作，克隆一只山羊
　　1995年7月 华南师大与广西农大合作，克隆一头奶牛、黄牛杂种牛
　　1995年10月 西北农大克隆6头猪
　　1996年12月 湖南医大克隆6只老鼠
　　同年，中国农科院畜牧所克隆一头公牛犊（以上为胚胎细胞克隆研究）
　　1997年3月 陈大元率先提出了克隆大熊猫的设想
　　1999年 中国科学院动物研究所研究员陈大元领导的小组将大熊猫的体细胞植入去核后的兔卵细胞中，成功地培育出了大熊猫的早期胚胎。克隆大熊猫面临的两个关键问题中的一个已经解决