利用罗氏xCELLigence系统实时监测细胞粘附和伸展[创新技巧]

罗氏供稿 生物通翻译 罗氏应用科学创新的xCELLigence系统让研究人员能够实时监测并定量评估细胞的粘附和伸展。这项技术是非侵入性的，也不需要费力且高成本的细胞标记及细胞裂解或固定。用户利用这种快速经济的方法，能在单个实验中监测生物事件中基质蛋白的作用。

罗氏应用科学创新的xCELLigence系统让研究人员能够实时监测并定量评估细胞的粘附和伸展。这项技术是非侵入性的，也不需要费力且高成本的细胞标记及细胞裂解或固定。用户利用这种快速经济的方法，能在单个实验中监测生物事件中基质蛋白的作用。

细胞外基质（ECM）蛋白如纤维连接蛋白与特定的细胞表面受体--整合素（Integrins）相互作用。整合素不仅调节细胞粘附，还通过与ECM蛋白的相互作用启始细胞内的信号级联反应，指导不同的胞内进程。不同生物表面的细胞粘附是动态、综合的过程，需要细胞表面受体、结构和信号蛋白以及细胞骨架的参与。

在一项xCELLigence系统的测评实验中，E-Plate包被了一层纤维连接蛋白或对照肽段。NIH3T3细胞接种到包被过的孔中，并通过测量阻抗变化并随时记录细胞指数（CI）单位，来监测期间细胞粘附和伸展的程度。当细胞接种在纤维连接蛋白包被的孔中，CI值显著增加，而接种到对照肽段孔中的CI值仅仅缓慢增加。另外，阻抗测量显示，纤维连接蛋白包被的细胞传感器上的细胞粘附程度取决于纤维连接蛋白的浓度（已通过手工细胞计数来验证）。这些数据支持了我们的设想----采用这项技术，细胞粘附和伸展可以在无标记的条件下进行实时定量的评估。

为了验证整合素受体功能的扰动是否可通过这项阻抗技术来评估，成纤维细胞与整合素抑制肽段共同孵育，然后接种到纤维连接蛋白包被的E-Plate中。利用xCELLigence系统，证实抑制剂能以浓度依赖的方式阻碍NIH3T3细胞粘附和伸展，而对照肽段无此作用。

肌动蛋白解离试剂在细胞粘附和伸展中的作用也能利用xCELLigence系统来监测。成纤维细胞与肌动蛋白聚合抑制剂共同孵育，然后接种到纤维连接蛋白包被的E-Plate中。肌动蛋白聚合抑制剂的存在实际上以浓度依赖的方式抑制了细胞粘附和伸展。

参与整合素调节的细胞粘附和伸展的信号蛋白群还包括非受体酪氨酸激酶类的Src家族。研究表明通过siRNA干扰或诸如PP2的小分子抑制剂干扰Src表达或活性，会导致人癌症细胞粘附和伸展的破坏，这一结果与xCELLigence系统的监测结果相符。

更多关于这项技术的信息，请访问www.xcelligence.roche.com。

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关于罗氏应用科学部
罗氏的诊断部门在成功收购德国宝灵曼公司（Boehringer Mannheim GmbH.）后，成立了专业服务于科学研究领域用户的罗氏应用科学部（Roche Applied Science），凭借半个多世纪在生命科学研究领域积累的经验，罗氏应用科学部已成为在此领域中具领先地位的试剂及系统供应商之一。从耗时少的，全自动的样本制备系统（MagNA Lyser 和MagNA Pure），到快速精准的卡盘式LightCycler®1.5/2.0和模块式高通量LightCycler®480系列荧光定量PCR仪，以及创新的超高通量基因组测序系统Genome Sequencer FLX Systemhe和NimbleGEN高密度DNA芯片，以及最新的xCELLigence高通量实时细胞分析检测系统，罗氏应用科学部研究和开发了多种应用于分子生物学相关研究领域的系统和试剂产品――广泛地应用在基因组学和蛋白组学研究中；同时罗氏应用科学部也提供用于生物医药和诊断行业方面的试剂，为用户需求提供完整的解决方案。更多关于罗氏应用科学部信息，请访问www.roche-applied-science.com。（编译 生物通余亮 校对 吴青）