诺贝尔奖得主最新发表RNAi新方法(免费下载)

【字体: 时间:2006年11月14日 来源:生物通

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  来自斯坦福大学医学院病理学和遗传学系,约翰霍普金斯医学院生物学系,以及华盛顿Carnegie学院(Carnegie Institution of Washington)等处的研究人员发展了一种能帮助观测体内细胞质中蛋白和蛋白相互作用的分析方法:differential cytolocalization assay(DCLA),这一方法已证实可以检测线虫RNA干扰和无意义介导衰变(nonsense-mediated decay,NMD) 途径过程中蛋白的相互作用。这一研究成果公布在《分子细胞蛋白质组学》(Molecular & Cellular Proteomics,MCP)杂志上。

  

生物通报告:来自斯坦福大学医学院病理学和遗传学系,约翰霍普金斯医学院生物学系,以及华盛顿Carnegie学院(Carnegie Institution of Washington)等处的研究人员发展了一种能帮助观测体内细胞质中蛋白和蛋白相互作用的分析方法:differential cytolocalization assay(DCLA),这一方法已证实可以检测线虫RNA干扰和无意义介导衰变(nonsense-mediated decay,NMD) 途径过程中蛋白的相互作用。这一研究成果公布在《分子细胞蛋白质组学》(Molecular & Cellular Proteomics,MCP)杂志上。

这一文章由2006年诺贝尔奖医学/生理学奖获得者之一Andrew Z. Fire领导完成。

链接:
A Differential Cytolocalization Assay for Analysis of Macromolecular Assemblies in the Eukaryotic Cytoplasm
Daniel Blanchard, Harald Hutter, Jamie Fleenor and Andrew Fire
[Abstract]

1998年2月,华盛顿卡耐基研究院的Andrew Fire和马萨诸塞大学医学院的Craig Mello证实,之前康奈尔大学Su Guo博士遇到的正义RNA抑制基因表达的现象,以及过去的反义RNA技术对基因表达的阻断,都是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起。当他们将体外转录得到的单链RNA纯化后注射线虫时发现,基因抑制效应变得十分微弱,而经过纯化的双链RNA却正好相反,能够高效特异性阻断相应基因的表达。该小组将这一现象称为RNA干扰(RNA interference ,简称RNAi)。

在随后的短短一年中,RNAi现象被广泛地发现于真菌、拟南芥、水螅、涡虫、锥虫、斑马鱼等大多数真核生物中。这种存在揭示了RNAi很可能是出现于生命进化的早期阶段。随着研究的不断深入,RNAi的机制正在被逐步阐明,而同时作为功能基因组研究领域中的有力工具,RNAi也越来越为人们所重视。

随着RNAi研究的发展,对于发生RNA干扰过程中的蛋白及蛋白相互作用的研究也越来越受到科学家们的重视。在这一研究中,Fire等人在线虫中利用DCLA技术检测了RNAi和NMD过程中的蛋白相互作用,这种DCLA主要是通过膜结合“诱饵”,重新定位一种绿色荧光蛋白标记的“猎物”。

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"之前也有通过DCLA技术获得蛋白相互作用关系的数据,但是没有统一的负对照(无蛋白相互作用),并且在这一研究中,研究人员获得一些新的相互作用,比如SMG-5相互作用——一种NMD必需蛋白,以及一些RNAi途径的元素。DCLA不用条件下操作都比较方便,可以进行体内蛋白相互作用动力学分析。

Fire等人的实验表明,DCLA技术可以帮助验证动物中RNAi和NMD亚族(subset)的相互作用,并且在没有辨认体内关键过程的前提下发现关键的联系。
(生物通:张迪)

附:
瑞典皇家卡罗林医学院的诺贝尔大会宣布,2006年度诺贝尔生物医学奖由美国麻萨诸塞医学院的克雷格.梅洛(Craig C. Mello)教授和史丹佛大学医学院教授安德鲁.法尔(Andrew Z. Fire)共同获得。

早在1998年,Mello博士与Fire博士就于Nature期刊中发表了有关RNA干扰法的概念:利用RNA片段来静默(silence)特定的基因,在观察基因关闭后细胞的现象,推测该基因的功用。

此外,这项获得2002年Science期刊“年度大突破”殊荣的发现,亦能关闭细胞或病毒的致病基因,因此被视为疾病治疗的新希望。如今,由RNA干扰法所衍伸出来众多学理上、临床上、以及药物开发与重大伤病疗法的开发应用方式不胜梅举,可谓贡献极大。

“我真的非常荣幸能与Andrew Fire博士共同得到诺贝尔奖这份殊荣”,年仅45岁的Mello博士表示:“能够看见RNA干扰法在全球广泛,应用实在是至高无上的喜悦。”

两位美国教授摘得大奖

诺贝尔奖评审委员会发布的公报说,法尔和梅洛获奖是因为他们“发现了控制遗传信息流动的基本机制”,这一机制为控制基因信息提供了基础性的依据。公报指出,RNA干扰已被广泛用作研究基因功能的一种手段,并有望在未来帮助科学家开发出治疗疾病的新疗法。

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"法尔生于1959年,现在是美国斯坦福大学遗传学和病理学教授。1960年出生的梅洛目前在美国马萨诸塞大学医学院任教。1998年,两位教授和其他科学家在《自然》杂志上共同发表论文宣布,他们发现了RNA具有可以干扰基因的机制。

RNA干扰机制的发现使得科学家可以对侵入细胞的病毒RNA进行控制。诺贝尔奖评审委员会指出,RNA干扰机制将来有望应用于临床医学和农业等众多领域,用来开发针对病毒感染、心血管疾病和癌症等的新疗法。近来有动物研究结果显示,可利用RNA干扰机制使高血脂基因“沉默”。

获奖者称自己还太年轻

今年的获奖者年龄偏低,他们从科学发现到获奖还不足10年的时间,这在诺贝尔奖历史上还属罕见。

梅洛是在美国家中接到诺贝尔奖评审委员会电话的,当时是当地时间4时40分左右。梅洛对媒体表示他感到“非常惊讶”,“到现在还没回过神来”。他说:“我有预感可能得奖,但我才45岁啊,原本以为10年或20年后才会得奖呢。”梅洛说,他的部分奖金将用于慈善事业。

法尔在接受媒体采访时则说,获奖的感觉真是非常美妙,“一开始,我都不敢相信,它也许是个梦,或者有人搞错了,但又想这不可能。能获奖真是太棒了!”他说:“我还是以前的我,我的人生追求仍很简单,那就是研究、科学、教学和家庭。我不想有什么改变。”

诺贝尔生理学或医学奖获得者的公布揭开了今年“诺贝尔周”的序幕。今后十几天,诺贝尔奖其他奖项的得主也将陆续公布于众。本年度诺贝尔奖各奖项获得者将独享或分享总额为1000万瑞典克朗(约合140万美元)的奖金。

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