Western Blotting前传：想成为高手吗？[心得点评]

不断的会听到有人说“怎么办，就要毕业了，我的Western blotting 还没有结果，如何能毕业啊”。确实，许多专业方向是生物化学，还有分子生物学或是植物，动物学专业的同学，只要是他们在毕业论文设计当中有涉及到下游蛋白方面的，Western blot结果就是一个必须的毕业结果，如果没有一个漂亮准确的Wb结果，许多论文就不够“perfect”，甚至不能毕业。

但是Wb结果有时候就是千呼万唤也不出来，出来了还犹抱琵琶半遮面，真是急煞了一旁等结果的人。仔细想想，其实Wb没有理想的结果原因很多，比如说本身实验设计不合理，上游载体构建方面的问题，蛋白表达假阳性，蛋白抗原被封闭或是Wb本身操作不规范等等许多问题，正如约翰·埃迪塞尔教授所说的“让我们把蛋白质看作具有独特而奇妙性质的实体”，相对于上游操作而言，下游蛋白表达或纯化方面有时确实是显得复杂的多。但是科技的进步就是有这点好处，你有什么样的需要，科学技术可以尽量帮你满足。在生物实验这个领域更是如此，所以当你排除了各种想得到的人为因素之后，埋头苦思冥想：到底我的实验哪儿出了错，为什么就是得不到我想要的Wb结果时，一定要抬起头来，看看到底新技术能帮到你什么，而不要一条胡同走到底，浪费了时间和金钱，更重要的是打击了自己对于实验的自信心和兴趣！

那么到底新技术能帮到我什么呢？真的可以让我得到可靠的结果吗？学生物的理科生反应迅速，马上就会问到。坦白说，要笼统的回答这个问题显然是不可能的，只有对症下药才能帮到我们解决问题。比如说，有些产品像Invitrogen公司的InVision His-tag凝胶染色剂，就根本不需要Western印迹，直接就可以在凝胶中显色，这就从根本上解决了Western问题，当然这也有其局限性，仅限于带有His-tag的融合蛋白。再比如Pierce公司的经典作品SuperSignal系列有West Femto级别的发光底物，灵敏度高达10—14，是目前为止已知的最灵敏的底物，也就是说，即使你的蛋白只有皮克量的表达，也可以通过这一产品得以检测。

Western印迹在我们生化操作中是一个里程碑，作用相当重要，做出一个Wb结果说明实验已经由DNA水平转到蛋白水平了，因为通过它的证明，我们确定之前的DNA操作基本正确，可以由此展开下游的表达条件摸索，蛋白纯化或性质分析等了，这也就是为什么当你投稿核心期刊时，只要是蛋白鉴定方面，大部分期刊都要求有Wb结果。因此就是只冲这一点，我们也应该在做Wb之前，仔细考虑下有什么好的技术，什么好的产品我们能用得上的，千万不可瞎冲瞎闯，只有将严谨的科研态度与好的实验手段结合起来，我们才能得到于自己满意，于科学发展有益的实验结果。（生物通作者：张迪）