市场定位是关键：聚焦转染之Promega篇[选购宝典]

【字体：大中小】 时间：2005年08月10日 来源：生物通

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自1978年William Linton 先生在美国威斯康辛州麦迪逊市（就是《廊桥遗梦》那里哦）创立Promega以来，今年已经是第26个年头了，也是Promega进驻中国的20周年――这个几乎可以说是国内生物技术最早的启蒙者之一的品牌非常了解国内科研经费来之不易，在进口品牌中以价格算可亲而广受欢迎。Promega的转染试剂产品由于市场定位较准确，获得的业内评价不错，尤其是在其价格经济实惠前提下，产品质量并没有因此打折扣（就是性价比高咯）。

1. siRNA转染试剂
CodeBreaker™ siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品，专门为有效转染siRNA而优化设计。这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞，促进基因沉默，而且毒性小，细胞死亡率低，比如转染CHO与HeLa细胞，使用CodeBreaker基因沉默率达到80%或更多，比起同类产品毒性小50%以上。这一产品操作简便，买来后即可使用，不用溶解。将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟，然后加到培养细胞即可。而且转染可在完全生长培养基中进行，不需要更换培养基或再加血清，简化了操纵步骤（见下）。CodeBreaker试剂适用的细胞有HeLa、HEK293、293T、CHO 和 3T3细胞等。价格1800/0.4ml，以24孔板为例，按照推荐剂量可以可以做200次，6孔板大约可用40次左右。
Day One：细胞铺板 (in complete growth medium).
Day Two
1. 将 CodeBreaker™ Reagent加到无血清培养基中，混合均匀，室温孵育15—20分钟。。
2. 制成复合物：加入siRNA到第二步中，轻微混合。室温孵育15—20分钟。
3. 然后与细胞混合， 37°C培育24—72小时，OK，检测吧。

2. DNA转染试剂
Transfast™ 是一种特殊的脂质体转染试剂，由阳离子脂类（+）-N,N[bis(2-hydroxyethyl)]-N-methyl-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和中性脂类DOPE（用于加强转染能力）组成。TransFast试剂是干脂膜，一旦水化后就形成多层脂质体，因此也就具有更多优势，尤其表现在可以传递多种生物大分子－－小的从寡聚核苷酸，到质粒DNA或者RNA，大到酵母人工染色体，都可用TransFast转染试剂传递进细胞（包括原代细胞），而且脂质体可以用于体外转染的同时还可以用于体内转染。迄今为止，已经证明 TransFast™ 转染试剂在转染NIH3T3，CHO，293，K562，PC12，Jurkat 和昆虫Sf9时特别好。Transfast一个包装是1.2mg（0.4mgx3）1800左右，每个管是干脂膜，用前一天要先用无核酸酶污染的水溶解后在负20度冻存过夜（可以反复冻融10次而不影响转染效率）；用的时候是要用无血清培养基稀释DNA，加适量融化混匀的转染试剂，去掉培养皿中的培养基后加入转染试剂－DNA复合物，温育1小时后补加完全培养基。如果对无血清非常敏感的细胞可能就不适合。

    Tfx是与TransFast结构类似的脂质体转染试剂，不同处也是Tfx最大的特点就是所有的Tfx 试剂含有相同浓度的阳离子脂成分，但其中融合脂类的DOPE的摩尔比例不同，故Tfx可分为Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50三种。这样实验人员就可以根据自己的需要选择适用的试剂。Tfx可在血清存在下转染细胞，这有利于转染原代细胞，因为原代细胞在没有血清存在时可能会失去活性。因此使用Tfx转染细胞需要的时间少，大多细胞系只需1个小时。Tfx可转染的细胞较多。一个包装的Tfx包含有Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50，可以配合不同的细胞使用，价格大约1600左右。

    Transfectam是一种用于转染真核细胞的阳离子脂质体，这种脂质体由dioctadecylamidoglycyl spermine（DOGS）复合而成脂多胺结构。其中的精胺基团（spermine）通过一个肽键共价结合于脂质部分，这样spermine头部的强正电荷使整个结构高度亲和于带负电的DNA分子，而脂质结构则包裹住整个分子，使之便于定位在细胞膜上。Transfectam 试剂可以有效转染广泛的真核细胞。目前已经用于进行了稳定和瞬时的转染，这些转染既包括已建立的细胞系，也包括原代细胞。除了用于DNA转染，Transfectam也可用于RNA转染和体内应用。0.5mg转染试剂才1400左右，需要用200ul100％乙醇溶解。使用还是挺方便的，可以在有血清的环境中转染。用量也很节约。

    ProFection是另外一个久经考验的，用磷酸钙法和 DEAE-Dextran方法的老产品，才900多，－－前提是你用惯就行。看惯了我们前面介绍的几种进口产品，动辄3千5千的，现在看Promega的价格是不是觉得松了口气啊？真是美国“大宝”啊，经济，实惠，量又足，嘿，你认准喽！

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