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[候选优秀论文]军事医学科学院杨晓
【字体： 大 中 小 】 时间：2005年10月21日 来源：生物通
编辑推荐：
【编者按】：为了鼓励更多的优秀论文在国内的核心刊物发表以及鼓励和发掘极具潜力的青年科学家，表彰优秀的实验成果，国内的一些核心期刊
、生物产品厂家与生物通联合举办了这次中国05-06生命科技年度优秀论文评选活动。为了让广大读者能够从这次活动中了解更多的国内科研进展，同时了解更多的科研技术，生物通将对获得投票数较多的文章进行介绍。这次介绍的是目前暂时投票数领先的文章。候选优秀论文：
李文龙，程萱，谭晓红，张继帅，孙岩松，陈林，杨晓.血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立，遗传学报.32(9):909-915.
文章介绍：
血管内皮细胞参与血管形成、血管稳态维持、血栓形成、炎症和血管重建等生理和病理过程。为了便于通过Cre-LoxP系统研究相关基因在血管内皮细胞中的功能，创建了Tie2-Cre转基因小鼠，利用Tie2基因的启动子驱动Cre重组酶基因在血管内皮细胞中表达。经基因组PCR和Southern Blot鉴定有6只小鼠在基因组上整合有Cre基因，整合率为11%。为了验证Cre重组酶的剪切活性和表达组织分布，我们将Tie2-Cre转基因小鼠分别与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配。Tie2-Cre;Smad4Co/+小鼠的多个组织的基因组DNA的PCR结果显示，Cre重组酶在所有包含血管内皮细胞的组织中表达并能介导LoxP 间的重组。Tie2-Cre;
ROSA26双转基因胚胎LacZ染色结果显示，Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。因此，Tie2-Cre转基因小鼠可作血管内皮细胞谱系分析和在血管内皮细胞进行条件基因打靶的理想工具小鼠。
技术介绍：
1980年，Gordon首次报道用DNA显微注射法（microinjection）获得了转基因小鼠；1982年，美国科学家Palmiter首次将大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵的雄性原核中，获得了转基因小鼠，其个体比对照鼠增大一倍，称之为“超级鼠”。我国是从1984年开始转基因动物研究的，并于同年获得了含人β-珠蛋白基因的转基因小鼠。利用显微注射法，1985年和1986年又分别获得了含人生长激素（MT-hGH）基因的转基因泥鳅和小鼠。
显微注射法制备转基因小鼠过程
本论文首先将10.5长的Cre片段连接到2.1kb长的Tie2启动子下。用显微注射装置将目的基因溶液导入受精卵雄性原核内。将已转入基因的受精卵自背部植入假孕母鼠的输卵管内，使胚胎在养母体内发育成熟。对幼鼠的鉴定：幼鼠发生断乳后自尾部提取DNA，先利用PCR进行鉴定后，再与目的基因探针作分子杂交，鉴定外源基因是否整合，有整合的鼠称为首建鼠（founder）。建立鼠系，将带有外源基因的小鼠与Smad4条件基因打靶小鼠和报告小鼠ROSA26交配、传代后，利用LacZ将小鼠组织切片进行染色，结果显示，Cre重组酶在所有被检测组织的血管内皮细胞中特异性表达。
构建此转基因小鼠是对血管内皮细胞进行研究的一项基础工作。此举可谓明修栈道，暗渡陈仓。将Cre基因的转入是为了把血管内皮细胞中特定基因敲除的基础。Cre-loxP重组系统是目前使用较多的条件性基因剔除（conditional gene knockout）技术。详细资料可以在原文：血管内皮细胞特异表达Cre重组酶转基因小鼠的建立中看到，有收获花一分钟投一票支持中国核心期刊的发展吧！
文章作者介绍：
第一作者：李文龙（1977～ ），男，硕士，研究方向：人类疾病动物模型。
通讯作者：杨晓，女，研究员，博导，研究方向：发育和分子疾病遗传学。
中国05-06年度核心期刊优秀论文评选活动获胜者可获万元奖金，而参与投票的网友也可获得转染试剂等精美礼品。了解更多生物技术，获得精美礼品！
第一站文章：
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第三站文章：
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记者 谢菲 |
注：目前暂时只有《遗传》、《遗传学报》、《中国农业科学》、《Genomics Proteomics&Bioinformatics》可进行投票。《遗传》、《遗传学报》和《中国农业科学》十月刊已经新鲜出炉！
