[候选优秀论文]南京大学王亚平研究小组

　　

【编者按】：为了鼓励更多的优秀论文在国内的核心刊物发表以及鼓励和发掘极具潜力的青年科学家，表彰优秀的实验成果，国内的一些核心期刊、生物产品厂家与生物通联合举办了这次中国05-06生命科技年度优秀论文评选活动。为了让广大读者能够从这次活动中了解更多的国内科研进展，同时了解更多的科研技术，生物通将对获得投票数较多的文章进行介绍。这次介绍的是目前暂时投票数领先的文章。

候选优秀论文：刘晓蓉，单祥年，Friedl W，Uhlhaas S，李金田，Propping P，王亚平. 应用蛋白截短技术检测APC基因胚系突变，遗传学报. 32 (9):903-908.

 文章介绍：

文章建立了蛋白截短检测技术，分析家族性腺瘤样息肉病（familial adenomatous polyposis, FAP）发病相关基因APC基因的胚系突变，研究基因正常突变型与结肠腺瘤样息肉病基因（adenomatous polyposis coli, FAP）疾病表型的关系。经临床诊断的22例FAP患者及43例散发性大肠癌患者，分别取外周静脉血和结肠粘膜组织，常规提取基因组DNA。应用蛋白截短检测技术（protein truncation test, PTT），分段分析APC基因巨大的第15外显子，对检出截短蛋白的样本进行测序，以确定突变位点及突变性质。22例FAP患者中，5例患者存在APC基因第15外显子的胚系突变，均为碱基缺失造成的移码突变，导致截短蛋白的产生；43例散发性大肠癌患者中未检测到APC基因第15外显子的胚系突变。蛋白截短检测技术是一种高效的基因突变分析技术，适用于大片段基因（如APC基因第15外显子）截短型突变的检测，可作为FAP症状出现前的常规基因诊断技术的一项有效补充。

 技术介绍：

许多疾病的发生与基因的突变是密切相关，因此近年发展出许多方法以检测突变的发生，在这些方法中都是以测序为最基本的步骤。按不同的原理可以分为以下几种：

突变扫描方法

²        RFLP：Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性，这可以说是几种方法中最便宜、最方便的突变扫描技术。这其中包括有片段长度分析、物理电泳法、异源双链核酸分子分析。

²        SSCP：Single Strand Conformation Polymorphism (也叫SSCA, Single Strand Conformation Analysis)单链构象多态性。这是一项相对较新的技术，它的基本原理是单链核酸序列在非变性胶中的特异迁移率。

²        DGGE：Denaturing Gradient Gel Electrophoresis变性倾斜凝胶电泳。

²        CCM&ECM：化学错配切割和酶错配切割

功能实验：

²        PTT：蛋白截断检测技术

²        STR：short tandem repeat短的串联重复或者微卫星不稳定性实验（microsatellite instability assays）

突变序列特异筛选方法（只可检测到特定的预设序列）

²        ASO：Allele-Specific Oligo Hybridisation特定等位基因寡杂交，也称为SSO，Sequence Specific Oligonucleotide特定序列寡核苷酸

²        OLA：Oligonucleotide Ligation Assay寡核苷酸连接实验

²        Allele-Specific PCR：特定等位基因聚合酶链式反应

以上突变检测方法的详细介绍可在讨论区中看到。

当基因发生移码或无义突变，使基因产物出现截短的多肽，即所谓的截短型突变。这种多肽并不能行使蛋白功能。蛋白截短检测技术（protein truncation test, PTT）是分析此类突变的一项高通量技术。《应用蛋白截短技术检测APC基因胚系突变》采用的就是PTT技术。

其大概的操作步骤如下图所示：

（图片来源：Promega 公司）

1 从组织和血液样本中提取基因组。真核生物普遍存在外显子结构，如本文根据经验基因的第15个外显子突变率较高，则对第15个外显子进行PCR。也可进行RT-PCR转录出cDNA。

2 在PCR时加入T7启动子，对产物直接进行体外转录\翻译反应。

3 对PCR产物进行测序和体外表达蛋白产物进行SDS-PAGE，检测是否突变。

更详细资料在原文：应用蛋白截短技术检测APC基因胚系突变中获得，有收获就一定花一分钟投一票啦。

 文章作者介绍：

第一作者：刘晓蓉（1975-），女，在读博士研究生，研究方向：大肠癌遗传易感性的研究。

通讯作者：王亚平，1956年9月出生，医学博士,南京大学医学遗传学教授，博士生导师。

主要研究方向：医学遗传学、肿瘤遗传学

主要研究成果：

错配修复基因 hMLH1 Val384Asp的发现、存在状况及在消化道肿瘤发病中的作用。

遗传性、家族性胃肠肿瘤发病相关基因分析与基因诊断系统的建立。

Wang YP, et al. Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer: Frequent Occurrence of Large deletions in MSH2 and MLH1 genes. Int J Cancer, 2003, 103636-641.

Wang YP，et al. A Modified Multiplex PCR Assay for Detection of Large Deletions in MSH2 and MLH1 Genes. Hum Mutat，2002，19:279―286.

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 记者 谢菲