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RNAi转染试剂龙虎榜——为你的RNAi实验选择合适的转染试剂[选购宝典]
【字体： 大 中 小 】 时间：2003年09月17日 来源：
编辑推荐：
RNA干扰技术（详细资料参考生物通RNAi专题）已经成为研究基因功能的有力工具。任何一个RNA interference实验的成功都有赖于： 生物通早前已经介绍过制备siRNA的5种方法的比较（RNAi：制备siRNAs的5种方法——如何选择最适合你的方法），大家可以从中寻找适合自己需要的方法。转染试剂的选择对于利用siRNA介导的基因沉默实验来说同样是至关重要的。没有高效的转染，siRNA就不能有效的引发相应的细胞响应，会直接影响同一siRNA的抑制效果。只有将siRNA高效转染哺乳动物细胞，才能更真实的检测siRNA干扰基因表达的效果。 如何选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。常见的转染试剂包括脂质体和多胺类的试剂，主要是为双链DNA转染而设计的。转染质粒DNA的最佳试剂往往不适合siRNA的转染，反之亦然。适合于质粒DNA转染用的转染试剂往往也不适合siRNA表达框（SECs: PCR fragments expressing siRNAs，参考RNAi：制备siRNAs的5种方法——如何选择最适合你的方法）的转染。随着RNAi技术越来越受重视，各厂家纷纷推出了自己的RNAi转染试剂。在这里，生物通为您搜罗了多种同类产品的信息参数和价格，甚至操作手册，方便您进行比较和选择。 一：siRNA专用转染试剂 （二：质粒和PCR片断专用转染试剂） ************************************************************* 产品名：RNAiFect Transfection Reagent 厂家：Qiagen 优点：高效低毒；适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便 简介：siRNA的转染是基因沉默实验中关键的一步。RNAiFect是一种基于脂质的转染试剂，专门用于siRNA转染，确保没有RNAse活性。传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。由于RNAiFect的内毒素和细胞毒性都非常之低，加上转染复合物能够高效的在完全培养基中形成，因而整个转染过程可以在含血清而且是含有抗生素的培养基中操作，无需更换培养基，这极大的方便转染操作！该试剂可以耐受较高浓度的siRNA转染而不引起细胞毒性，能够得到更好的抑制效果，适用于包括AGS, HEK-293, HeLaS3, Huh-7, HUVEC, NIH-3T3, and mouse embryonic fibroblasts cells在内的多种真核细胞。
参考数据：
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操作手册：RNAiFect Transfection Reagent 操作手册 综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 产品名：TransMessenger Transfection Reagent 厂家：Qiagen 优点：高效转染；RNA专用即用型试剂； 简介：TransMessenger是第一个专门为转染RNA而设计的非脂质体的脂质型的转染试剂。没有RNase活性，内毒素≤10 EU/ml，经严格设计去除所有可能降低RNA转染效率的成分，确保高效转染。独特的缓冲液促进RNA聚集，经脂质体包装成为高效转染复合物。适用于包括293, BSC-1, MA104, MRC, Primary cortical and hippocampal cells, TRM-6 and TRM-6/PDX-1 cells, TU7D, Vero在内的多种细胞。 操作流程：将RNA和Enhancer R，Buffer EC-R室温混合5分钟，加入TransMessenger Reagent室温孵育5—10分钟，加入培养基混合后加入细胞中，再温育培养3小时，更换培养基继续培养直到检测。 操作手册 订货信息（点击产品名可以直接在生物通商城订货）：
综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 产品名：The Silencer siRNA Transfection Kit: siPORT™ Amine 和 siPORT™ Lipid 厂家：Ambion 优点：专为siRNA转染不同细胞类型而设计 简介：目前主流的转染试剂类型主要是脂质类和多胺类两种，由于不同的细胞“偏爱”不同类型的转染试剂，因而对不同的细胞株的转染效率可能大相径庭，另外转染效率也和被转染的大分子类型有关（dsDNA, RNA, dsRNA, Oligo...）。siPORT Amine (a polyamine mixture) 和 siPORT Lipid (a mixture of cationic and neutral lipids)是专门为siRNA转染哺乳动物细胞而设计的。正如前面提到的，两种不同的类型对不同的细胞株有不同的表现：例如 siPORT Lipid 转染Hela的效率明显更高，而 siPORT Amine 更适合转染293细胞。两种转染试剂的细胞毒性都很低，非常适合转染包括化学合成的siRNA，以及体外转录或者长片断双链RNA由RNAseIII/Dicer酶降解制备的siRNA库在内的小分子RNA。The Silencer siRNA Transfection Kit中分别提供了这两种不同类型的转染试剂，方便实验人员在遇到各种细胞株时都可以分别尝试两种试剂，找到最适合的转染产品和方法，因而适用范围更宽。另外试剂盒提供针对GAPDH的siRNA的正负对照，用来检测转染的情况，比较适合初次使用。试剂盒的组分也有单独提供的。 操作流程：用OPTI-MEM I reduced serum medium（Gibco）培养基稀释转染试剂，室温孵育10—30分钟，加入siRNA，再室温孵育15—20分钟。（洗细胞）加入培养细胞中，4小时后加普通培养基(e.g. DMEM with 10% FBS)继续培养直到检测。
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操作手册：siPORT™ Amine 和 siPORT™ Lipid 操作手册 综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 产品名： GeneEraser™ siRNA Transfection Reagent 厂家：Stratagene 优点：专门为siRNA转染多种细胞而设计，高效转染，只需低浓度siRNA；毒性更小，操作简便； 简介: RNAi实验要求专门为siRNA转染而优化的转染试剂，GeneEraser正是这样一个产品，可以高效直接将siRNA运送到细胞质中以便和mRNA结合并引发mRNA降解，只需要很低浓度的siRNA就可以使特定的基因表达沉默。在Hela细胞中的转染效率可高达95%—100%。相比很多阳离子脂质体转染试剂，GeneEraaser低毒性可以显著减少对细胞的伤害。适用于包括CHO-K1，NIH/3T3，HT-29，A549，293，Hela，Monkey Kidney在内的多种细胞。可以在有血清的培养基中转染，无需更换培养基。 操作流程：用无血清培养基稀释GeneEraser，室温孵育5—15分钟，加入siRNA再室温孵育5—15分钟；将转染复合物加入刚刚更换新鲜培养基(含血清)的细胞中，继续培养直到检测。 操作手册：GeneEraser™ siRNA Transfection Reagent手册 订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购 :-)
综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 产品名：Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent 厂家： Invitrogen 优点：高效低毒，耐血清，易于操作，适用范围广 简介：Lipofectamine™ 2000是Invitrogen公司著名的DNA转染试剂，在RNAi技术日益普及的今天，Invitrogen公司特地为其推出适用于siRNA转染的Protocol，使之同样能高效转染siRNA。两个关键性特点使得LIPOFECTAMINE 2000试剂的转染步骤快速简便：（1）DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，以及（2）转染后不需要除去Lipofectamine™ 2000试剂。适用于包括HEK 293, BHK, CHO-K1,和A549在内的多种细胞。 操作流程：用无血清培养基分别稀释siRNA（20pmol）和Lipofectamine™ 2000，室温孵育5分钟后，混合，继续孵育20分钟，直接加入培养细胞中，继续培养直到检测。 操作手册：Lipofectamine™ 2000 Transfection Reagent用于siRNA转染的流程 订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购 :-)
综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 产品名：RiboJuice™ siRNA Transfection Reagent 厂家：Novagen 简介：专门为siRNA转染优化设计的转染试剂，高效转染，低毒设计，适用于包括Neuro-2A， BHK，COS-7，MCF-7，NIH，3T3，A549，HeLa，HEK293，CHO，HepG2，L6在内的多种细胞。还可以和DNA转染试剂一起实现siRNA和DNA质粒的共转染，便于衡量转染效果。 操作流程：无血清培养基稀释RiboJuice，静置5分钟后加入siRNA，孵育5—15分钟后直接加入培养细胞中，继续培养直到检测 操作手册：RiboJuice™ siRNA Transfection Reagent操作手册 订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购 :-)
综合指数：（最高 5 星）
*************************************************** 据厂家资料显示可以做RNA和Oligo转染还有不少产品，包括：罗氏公司的Fugene 6（这也曾是本人至爱）和DOTAP转染试剂， Promega公司的TransFast和Tfx，Transfetam转染试剂，Invitrogen公司可以用于转染RNA的DMRIE-C转染试剂，和转染寡核苷酸专用的Oligofectamine，也可以用于RNAi实验，但是很遗憾，由于资料不全，没有找到这些产品用于RNAi实验的具体应用，所以我们在此暂时不作介绍。另外还有部分优秀的siRNA专用转染产品本身在国内没有正规的销售渠道所以没有提到，生物通今后会陆续将相关的资料不断补充进来，如果您有相关的使用经验并愿意和大家分享，欢迎提供给我们。
二、siRNA构建质粒和PCR片断转染试剂 产品名：siPORT™ XP-1 厂家：Ambion 简介：号称是RNA公司，也是最早投身RNAi领域并致力生产和推广RNAi相关技术和产品的Ambion公司，率先推出商品化的siRNA表达质粒（可以通过质粒方便的在细胞内表达siRNA）和PCR产物直接转染细胞制备siRNA的方法，同时也为这两种方法提供了专用于siRNA构建质粒和PCR片断的转染试剂siPORT™ XP-1。这个多胺类的转染试剂毒性低，易于使用，能够在有血清的条件下高效的将质粒DNA或者PCR片断转到哺乳动物细胞，不需要更换培养基。多数质粒转染试剂不适合较短的线性DNA的转染，而XP-1是专为SECs和PCR产物转染优化设计的，结果更有保证。
操作流程：无血清培养基稀释转染试剂，静置5-20分钟后加入DNA或者PCR片断，孵育5—20分钟后直接加入培养细胞中，继续培养直到检测。 操作手册：siPORT™ XP-1操作手册 订货信息：（暂时未有价格 :-)
在本次测评中综合指数没有转染效率一项，原因是根据各厂家的阐述很难评出其差别，siRNA抑制基因表达本来就是一个和试剂量有关的过程，不同的细胞株，不同基因，不同的siRNA和不同的siRNA量，不同的操作都会影响实验的结果。有的转染试剂“耐受”RNA少，或者说载量较小，要增加siRNA的量就要相应增加转染试剂的量，影响转染，有的试剂可以承载较多的RNA，容易得到较好的结果，因而难以客观的评价。很少有实验室能有机会“用遍”各种产品。不过不同的实验室会选择不同的产品，有自己的使用心得，如果能将这些心得汇集起来，对于后来的新手将是非常实用的参考。如果您已经使用过其中一种或者其中几种产品，并愿意将使用心得和大家一起分享，欢迎联系我们： info@ebiotrade.com。我们随后还将尝试征集一些实验室自愿无偿试用这些产品，给大家更真实全面的用户参考。 要成功的进行siRNA的转染实验，除了要选择适合的转染试剂外，还需要对实验条件进行优化，包括siRNA浓度，质量，细胞密度，血清的浓度以及转染试剂的量。生物通将随后推出文章，就siRNA浓度，质量，细胞密度，血清以及转染试剂的量对转染过程的影响进行探讨，欢迎关注。 相关文章： |
