外泌体鉴定

国际细胞外囊泡学会(ISEV) 在2014年的提议,对于提取获得的外泌体,需要通过以下手段进行确认:


       双层囊膜结构是外泌体重要标志之一,但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜 (Transmission electron microscope, TEM) 分辨率可达0.1 ~ 0.2 nm,可将被观察物体放大至数百万倍,非常适合进行外泌体双层囊膜超微结构观测。
       表观生物技术团队拥有丰富的外泌体电镜样本处理与鉴定经验,可为客户提供高质量外泌体TEM检测服务,获得样本中外泌体典型形态特征图片 (如图一)。

透射电镜形态鉴定


图一、由表观生物拍摄的外泌体TEM照片,图中清晰显示出外泌体的囊泡状结构

Nanosight粒径密度分布分析
       透射电镜观察能够确认外泌体的形态学特征,但无法体现样本中所有外泌体颗粒的粒径分布情况及整体浓度;流式细胞仪可测定的粒径大小为150nm以上,并不适合检测游离的外泌体颗粒。表观生物采用基于马尔文Nanosight平台的纳米颗粒追踪分析 (Nanoparticle Tracking Analysis, NTA) 技术,快速、精准地分析外泌体粒径分布浓度,为外泌体存在提供有力证据 (如图二)。


图二、Nanosight平台分析表明,提取颗粒物粒径大多数处于100nm左右,符合预期外泌体特征

外泌体全转录组测序



       外泌体中包含mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等多种RNA分子,不同类型细胞所分泌的外泌体包含的RNA分子不同,这些RNA分子以外泌体为载体进入靶细胞后,会通过不同的机制对靶细胞产生影响。通过高通量测序技术分析外泌体RNA分子差异,是对外泌体RNA功能研究的有效手段。
       表观生物在提取高纯度外泌体总RNA分子基础上,为外泌体研究提供专业高通量测序服务,采用全新文库构建技术,可获得mRNA、lncRNA、circRNA及miRNA等丰富信息,全面提升外泌体研究深度及广度。

测序平台:Illumina HiSeq X10/Hiseq 4000
测序模式:PE150
适用物种:人、大小鼠
样本类型:血清/血浆、培养基上清、尿液、唾液等
样本分组建议:10 VS 10



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